耐药性鲍曼不动杆菌噬菌体特性和基因组及应用效果评价

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目的:耐药性鲍曼不动杆菌已成为医院主要的病原体,且很容易通过交叉感染在医院内爆发流行,威胁患者的生命。寻找有效的预防及治疗的方法是临床亟待解决的问题。噬菌体被认为是针对耐药菌防治的一种有效手段。本论文对噬菌体消毒和治疗的有效性进行了初步研究,为防治多耐药鲍曼不动杆菌感染提供新的思路。方法:本研究根据鲍曼不动杆菌耐药严重的现状,对收集到的40株耐药性鲍曼不动杆菌进行脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型;并以这些菌为指示菌分离噬菌体;选取其中一株噬菌体IME-AB2进行生物学特性和全基因组分析;并对该噬菌体在菌液及物体表面的消毒效果进行了探究,采用噬菌体吸入治疗小鼠多耐药鲍曼不动杆菌肺部感染,研究其体内治疗效果。结果:40株耐药性鲍曼不动杆菌显示对大多数抗生素耐药,包括含酶抑制剂和碳氢霉烯类。通过脉冲场凝胶电泳可将细菌分为A、B、C共3个种克隆型,B型26(65%)株,为主要的克隆型。多位点序列分型中发现细菌共分13个ST型,以ST208为最原始ST型,ST218、ST195、ST369、ST451、ST238、ST368、ST469均由ST208分化而来,共24株(占60%)。本研究成功分离出16株耐药性鲍曼不动杆菌噬菌体,对40株菌的裂解覆盖率达78%。选取一株噬菌体IME-AB2进行研究,该株噬菌体滴度高达1011pfu/ml,可以快速吸附到宿主菌表面,潜伏期和爆发时间短,在LB培养基中可以4℃长期保存,反映出该株噬菌体裂解的高效能和稳定性。电镜观察显示这株噬菌头部呈二十面体结构,含有尾部结构,属于肌尾噬菌体。噬菌体IME-AB2基因组是一条环状的双链DNA分子,全长43665bp,全基因组平均GC含量为37.5%,编码82个蛋白质基因。全基因组序列已在NCBI GenBank注册(GenBank Accession number:JX976549)。该株噬菌体能在4小时内使混浊菌液变澄清,并且能使器物表面的细菌数量明显减少。在通过吸入治疗小鼠肺炎的研究中,小鼠肺部接种细菌后30min,4h,24h给予噬菌体治疗,分别得到100%,50%,20%的生存率;以不同MOI(感染复数)进行治疗,MOI=1时生存率100%,MOI=0.1时生存率80%, MOI=0.01时生存率60%,MOI=0.001时生存率50%,PBS组生存率只有10%。治疗的小鼠肺泡灌洗液中的细菌明显少于非治疗组,噬菌体数量没有明显差异,小鼠肺脏病理结果显示噬菌体疗效显著。结论:噬菌体对耐药性鲍曼不动杆菌具有良好的体内、外抗菌作用,为临床开发防治耐药性鲍曼不动杆菌感染的制剂提供实验基础。图16幅,表13个,参考文献41篇。
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