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PCR是20世纪80年代发展起来的体外酶促扩增特定DNA片段的技术。它具有特异、敏感、快速、简单的优点，能在实验室条件将特定DNA片段于数小时内扩增10~5～10~9倍，产物经琼脂糖凝胶电泳，可见到预期大小的DNA条带出现，从而可对疾病病原体的基因组片段作出鉴定。本文主要研究PCR技术在犬瘟热、犬细小病毒感染、犬腺病毒感染、犬巴贝斯虫病病原体诊断中的应用。根据GenBank上发表的病原体基因组序列，在保守区域设计特异性引物，应用RT-PCR或PCR方法从病料总RNA或DNA中扩增出病原体特异的基因组片段，通过琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定PCR产物，然后采用半嵌套式PCR，限制性内切酶酶切或序列分析对PCR产物作进一步的分析鉴定，最终对疾病作出确切诊断。本文在对犬瘟热疾病诊断中采用半嵌套式RT-PCR方法，设计特异性引物，首轮PCR扩增586bp的基因片段，第二轮PCR扩增476bp的基因片段。结果在29份临床病料中检出19分阳性；在对犬细小病毒病的诊断中采用PCR和序列分析的方法，设计特异性引物扩增犬细小病毒448bp的基因片段，随后对448bp的基因片段进行序列分析。结果在38份临床病料中检出27份阳性；在对犬腺病毒感染和犬巴贝斯虫病的诊断中均采用PCR-RFLP方法和序列分析的方法，设计2对特异性引物同时对病料中的DNA进行扩增，然后对PCR产物进行RFLP分析和序列分析。结果分别在59份和26份临床病料中检出5份和3份阳性，且腺病毒阳性病例病原均为犬传染性肝炎病毒，犬巴贝斯虫阳性病例病例均为犬吉氏巴贝斯虫；在对犬细小病毒和犬腺病毒混合感染的诊断中采用多重PCR方法，设计2对特异性引物在同一反应体系内同时对病料中犬细小病毒和犬腺病毒的DNA进行扩增。结果在38份临床病料中检出27份犬细小病毒阳性，未发现犬腺病毒感染。初步临床检测结果证明PCR方法能够快速、准确的对犬瘟热、犬细小病毒感染、犬腺病毒感染、犬巴贝斯虫病作出诊断，而且能够对病原体种类作进一步的鉴定。