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目的:
实验一:通过收集骨肉瘤及癌旁组织临床病理标本,研究piezo1在骨肉瘤样本中的表达情况,阐述Piezo1与骨肉瘤发病的潜在关联。
实验二:通过细胞实验,观察Piezo1在姜黄素干预的骨肉瘤细胞系U2-OS中的表达情况,并分析Piezo1及姜黄素共同干预对细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响。
方法:
实验一:收集临床骨肉瘤病理标本,本实验共纳入5例骨肉瘤患者癌组织及对应癌旁组织的石蜡标本;制作石蜡切片进行免疫组化分析,检测piezo1的表达。所有病理标本均来自广州中医药大学第一附属医院。
实验二:通过U2-OS细胞系,将细胞以不同浓度姜黄素进行干预,应用转录组测序技术检测姜黄素干预细胞后转录组基因表达情况,应用姜黄素、siRNA分别及共同干预细胞后,Q-PCR、western blot、钙成像检测piezo1基因及蛋白表达,划痕实验检测细胞迁移功能,AnnexinⅤ/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡及增殖。
结果:
免疫组化结果示对比癌旁组织,在骨肉瘤组织中piezo1基因表达较高;且转录组测序结果示姜黄素干预细胞后piezo1基因明显下调,QPCR、western blot及钙成像验证姜黄素对piezo1的下调作用及piezo1沉默的作用。划痕实验、流式细胞术结果表明姜黄素及沉默piezo1后可抑制细胞的迁移和增殖,促进细胞凋亡,当姜黄素及siRNA共同干预细胞后,细胞增殖及迁移能力进一步下降,诱导细胞进一步凋亡。
结论:
Piezo1在骨肉瘤组织中高表达,可能是骨肉瘤诊断、治疗的潜在靶点。另,Piezo1蛋白在骨肉瘤细胞系的多种生理活动中起重要作用,Piezo1特异性沉默可增加骨肉瘤细胞对姜黄素的敏感性,可进一步抑制骨肉瘤细胞的迁移并促进细胞凋亡,为骨肉瘤的治疗提供的新的思路。
实验一:通过收集骨肉瘤及癌旁组织临床病理标本,研究piezo1在骨肉瘤样本中的表达情况,阐述Piezo1与骨肉瘤发病的潜在关联。
实验二:通过细胞实验,观察Piezo1在姜黄素干预的骨肉瘤细胞系U2-OS中的表达情况,并分析Piezo1及姜黄素共同干预对细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响。
方法:
实验一:收集临床骨肉瘤病理标本,本实验共纳入5例骨肉瘤患者癌组织及对应癌旁组织的石蜡标本;制作石蜡切片进行免疫组化分析,检测piezo1的表达。所有病理标本均来自广州中医药大学第一附属医院。
实验二:通过U2-OS细胞系,将细胞以不同浓度姜黄素进行干预,应用转录组测序技术检测姜黄素干预细胞后转录组基因表达情况,应用姜黄素、siRNA分别及共同干预细胞后,Q-PCR、western blot、钙成像检测piezo1基因及蛋白表达,划痕实验检测细胞迁移功能,AnnexinⅤ/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡及增殖。
结果:
免疫组化结果示对比癌旁组织,在骨肉瘤组织中piezo1基因表达较高;且转录组测序结果示姜黄素干预细胞后piezo1基因明显下调,QPCR、western blot及钙成像验证姜黄素对piezo1的下调作用及piezo1沉默的作用。划痕实验、流式细胞术结果表明姜黄素及沉默piezo1后可抑制细胞的迁移和增殖,促进细胞凋亡,当姜黄素及siRNA共同干预细胞后,细胞增殖及迁移能力进一步下降,诱导细胞进一步凋亡。
结论:
Piezo1在骨肉瘤组织中高表达,可能是骨肉瘤诊断、治疗的潜在靶点。另,Piezo1蛋白在骨肉瘤细胞系的多种生理活动中起重要作用,Piezo1特异性沉默可增加骨肉瘤细胞对姜黄素的敏感性,可进一步抑制骨肉瘤细胞的迁移并促进细胞凋亡,为骨肉瘤的治疗提供的新的思路。