血栓性疾病久据全球疾病总死亡率的第一位,是全球性的重大健康问题,目前仍然缺乏治疗效果持久、无副反应的理想溶血栓药物。补体及凝血级联反应普遍存在于多细胞生物中,对于维持凝血-纤溶系统平衡和激活先天性免疫具有重要的作用。方格星虫是一种古老的海洋底栖蠕虫类生物,味道鲜美且具有一定药用价值,广受台海地区居民喜爱。研究显示方格星虫体内存在能够显著改善人体多种代谢功能的物质,对心脑血管系统的保护作用尤为明显。方格星虫体腔液中存在多种类型的细胞和器官,与哺乳动物类似,且进化地位低等、形体构造简单,是研究动物补体及凝血级联反应的绝佳物种。本文采用血栓粉溶解后注射进方格星虫体腔,刺激其发生溶栓和激活补体系统,来研究方格星虫体内的补体及凝血级联反应,并由此挑选其中的重要调控因子进行分析,研究结果如下:1、通过KEGG富集分析转录组测序结果获得方格星虫补体及凝血级联通路的差异表达基因,使用实时荧光定量PCR对差异基因MBL、PLG、A2M、C6、CR4、F5、CR1、F11和UPA的表达情况进行验证,推断血栓刺激后方格星虫体内的内源性凝血途径、纤溶途径和补体激活的凝集素途径可能被激活,而外源性凝血途径、激肽系统、补体激活的经典途径和替代途径未能被激活。2、从方格星虫转录组数据库中分析获得蛋白酶抑制剂A2M及其同家族成员CPAMD8的基因序列,通过RACE技术克隆获得其开放阅读框,经过Conserved Domains分析显示A2M具有三个保守功能结构域,CPAMD8具有两个保守功能结构域,并对其蛋白质结构进行了预测,进化分析显示二者与鸭嘴海豆芽的A2M和CPAMD8基因具有较高的同源性。使用实时荧光定量PCR对A2M和CPAMD8基因在方格星虫各组织的表达情况进行分析,发现两者均在翻吻肌中高表达。综上所述,本研究从转录组测序到关键基因克隆,首次对方格星虫补体及凝血级联系统上的基因进行挖掘和功能研究,为进一步探讨方格星虫补体系统,揭示无脊椎动物凝血级联及补体的进化脉络奠定了初步基础。