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弧菌(Vibrio)是一类制约我国海水养殖业发展的重要病原菌。随着我国海水养殖业发展,疾病频发,用药增多,弧菌的耐药问题日益严重。为探索弧菌耐药机制,本实验从上海、江苏和山东等地区的水产养殖患病动物(包括南美白对虾、三疣梭子蟹、半滑舌鳎、大菱鲆等),以及水产养殖环境(包括底泥和养殖池水等)中采集酰胺醇类药物低敏感菌株,进行分离、纯化与鉴定,开展对16种抗菌药物的药物敏感性实验,并检测耐药基因和整合子的携带情况。同时,通过添加4种外排泵抑制剂,探讨对酰胺醇类药物(氟苯尼考和氯霉素)和喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星和诺氟沙星)的敏感性影响,以期解析弧菌对酰胺醇类药物和氟喹诺酮类药物耐药机制。本实验共分离到120株弧菌,经过实验室的分离、纯化与鉴定,鉴定结果如下:溶藻弧菌(V.alginolyticus)数量最多,共44株,占总数的36.67%;大菱鲆弧菌(V.scophthalmi),共42株,占总数的35%;哈维氏弧菌(V.harveyi)16株,占总数的13.33%;副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)14株,占总数的11.67%;鳗弧菌(V.anguillarum)和创伤弧菌(V.vulnificus)最少,各2株。120株弧菌对16种药物的敏感性测定结果显示,酰胺醇类药物和磺胺类药物的耐药率最高。其中,对氟苯尼考耐药的菌株有118株,耐药率达到98.33%;中介菌株2株;对氯霉素耐药的菌株有61株,耐药率51.67%,中介菌株49株。对氯霉素和氟苯尼考双重耐药的菌株有60株,占50%。磺胺甲基异噁唑、复方新诺明耐药率分别达到97.5%和100%;喹诺酮类药物的耐药率并不高,其中,环丙沙星耐药率17.5%,诺氟沙星耐药率16.67%,恩诺沙星32.5%。土霉素,新霉素,红霉素的耐药比率均达到50%以上。细菌对头孢曲松、头孢吡肟和美罗培南均较为敏感。检出酰胺醇类耐药基因floR118株,检出率98.33%,cat2检出率13.33%、cat37.5%;磺胺类耐药基因sul1检出率7.5%、sul2检出率6.67%;氨基糖苷类耐药基因strA检出率9.17%、strB检出率10.83%、aadA检出率3.33%、aacA检出率5%;β-内酰胺类耐药基因TEM检出率1.67%、carB检出率5.83%;四环霉素类耐药基因tetB3.33%;喹诺酮类药物耐药基因qnr A检出率1.67%、qnrVC检出率25%。添加四种外排泵抑制剂(甲基吡咯烷酮(N-methyl-2-pyrrolidone,NMP)、利血平(Reserpine)、羰基氰氯苯腙(Carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone,CCCP)和苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺(Phe-Arg-β-naphthylamide,PAβN)后,有部分菌株呈外排泵阳性结果。其中,加入40μg/m L利血平后,120株弧菌中有25株弧菌的氯霉素耐药性发生改变,24株弧菌的恩诺沙星,4株弧菌的诺氟沙星,13株弧菌的环丙沙星的耐药性发生了改变。加100μg/m L PAβN或NMP,120株弧菌中氯霉素外排阳性菌株各为16株,氟苯尼考外排阳性菌株均为2株,恩诺沙星外排阳性菌株分别为6株和22株,环丙沙星外排阳性菌株分别为14株和17株,诺氟沙星外排阳性菌株分别为3株和6株。120株弧菌中,120株弧菌中,添加5μg/mL CCCP后,有82株弧菌为氯霉素外排阳性菌;76株弧菌为氟苯尼考外排阳性菌;5株弧菌为环丙沙星外排阳性菌;有30株弧菌为恩诺沙星外排阳性菌;有8株弧菌为诺氟沙星外排阳性菌,明显高于其他外排泵抑制剂,因此CCCP被验证可以作为有效的酰胺醇类和喹诺酮类药物耐药弧菌的外排泵抑制剂。