背景 肾上腺髓质素(adrenomedullin，ADM)是一种最早从人类嗜铬细胞瘤提取液中发现的血管舒张肽。随后的研究发现ADM不仅仅是一种舒张剂，而且是一种多功能调节肽，具有广泛的生物学效应，包括调节细胞的生长、分化，调节激素的分泌，抗凋亡、抗移行等多种功能。但是上述大多数作用都表现出依赖细胞类型特异性。如在3T3细胞，ADM可以剂量依赖性地提高DNA的合成，这种作用通过ADM特异的受体激活cAMP／PKA通路。在培养的人正常胶质细胞和胶质细胞瘤，ADM升高细胞内cAMP并抑制细胞生长。人和鼠的星形细胞瘤、人的神经胶质瘤和培养的神经胶质瘤源细胞系的生长可以被ADM抑制。但是，Moody等报道ADM促进培养的C6、细胞胶质细胞增殖，其作用与升高cAMP和上调c-fos表达有关。了解ADM作用机制的最基本的问题是要了解一个在膜表面的刺激是怎样被传递到细胞核引起一系列的基因表达，最终使细胞对外环境的变化产生适当的生理反应。已有一系列有关ADM激活的信号传导通路的研究，发现在大多数情况下，cAMP是ADM大多数作用时激活的一个主要第二信使。但是ADM的作用却不能完全被腺苷酸环化酶forskolin所模拟，这意味着可能在ADM的作用时还有其它第二信使参与。 ADM广泛分布于机体的绝大多数组织和细胞，包括眼内。从猫类和其哺乳动物以及人分离的虹膜括约肌，ADM是一种较降钙素相关肽更为有效的腺苷酸环化酶抑制剂。Udono等发现，3种人RPE细胞系(F-0202，D407，ARPE-19)表达ADM mRNA，在其培养液中用放免的方法可以检测到ADM活性。IFN-γ和IL-β可以时间和剂量依赖性增加培养RPE细胞(ARPE-19)ADM mRNA表达及培养液中ADM的活性。进一步的研究发现缺氧增加ADM mRNA在前述3种人RPE细胞系表达，然而缺氧引起的ET-1表达仅存在于D407。由此认为，ADM可能参与生理及病理条件下调节RPE细胞的功能。 RPE是一层位于视网膜神经感觉层与脉络膜之间的细胞，在眼的代谢中起到重要。RPE细胞的凋亡、变性和增殖导致多种致盲性眼病，如视网膜色素变性、老年相关性黄斑变性和增生性玻璃体视网膜病变(PVR)。Udono等用放射性免疫测定的方法研究了41例视网膜疾病病 第四军医大学博士学位论文 人玻璃体液ADM的含量，发现增殖性玻璃体视网膜患者的玻璃体中 ADM的含量显著高于增生性糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性 和黄斑裂孔，推断ADM可能参与了增生性玻璃体视网膜病变的病理过 程。显著升高CAMP水平的药物也是pE细胞移行的抑制剂。最近的研 究表明，ADM可以剂量依赖性抑制PDGF－BB和血清诱导的平滑肌细 胞的移行。以上的研究表明ADM可能参与一些RPE细胞相关性眼病 的病理过程。但是目前对ADM激活的pE信号传导途径仍没有了解， ADM对RPE的生理作用及药物作用机制仍不清楚。 在本研究中，我们的目的是观察 ADM和肾上腺髓质素受体 （ADMR）mRNA是否在原代培养的 RPE细胞和 PVR前膜标本中表 达。如果表达，LPS是否可以上调 ADM和 ADMRmRNA在原代培养 的RPE细胞的表达；ADM是否可以抑制血清刺激和静止的yE细胞 的增殖；ADM对RPE细胞的作用是否通过两条独立的信号传导途径， 上调“惭水平和抑制钙内流：＊＊M是否对y E的粘附和基础及10％ 血清诱导的移行有作用。我们还同时观察了ADM是否激活RPE细胞 的核转录因子－a。 方法（1）培养人的RPE细胞。用原位杂交法观察LPS刺激及未刺激 的 yE细胞 ADM和 ADMRmRNA的表达。用原位杂交法观察来自 10 个 PVR病人前膜标本中 ADM和 ADMRmRNA的表达。（2）我们将 RPE培养在标准的含或不含血清的 DMEM培养液中，加入 10－‘’l”’M 的 ADM。用 3H掺入法和 MTT法测定 yE的增殖。用 Boyden chamber 法观察ADM对10％血清诱导的nE细胞的移行的作用。（3）将RPE 细胞培养在含与不含ADM的PBS中15分钟，用酶免疫法测定细胞内 CAMP和 CGNIP的水平的变化。用共聚焦显微镜观察 lCO－3 AM负载的 RPE细胞 10””l“’M ADM作用后胞浆游离钙浓度的变化。N）LPS作 用培养RPE细胞60分钟后，免疫荧光染色法观察NF－h Rel o65） 的核转移。用 western blot分析法检测胞浆内 NF．h蛋白表达。 结果（l）在培养的hRPE可分别看到ADM和ADMR rTmiA的原位 杂交染色呈棕色阳性信号，定位于胞浆中。LPS可以上调ADM和 ADMRmRNA的表达＊ 0个 PVR膜标本中有 7个 ADM和 ADMlbllRNA 的信号为阳性。（2）ADM剂量依赖性抑制血清刺激的 RPE细胞的增 殖。对照组A值为0．3416土0．0199。最大抑制作用时浓度是10－