背景:关于内生真菌(Fungi endophytes)的研究最早始于1989年,由Vogl从植物黑麦草的种子中分离出来。后经研究陆续发现内生真菌能产生与宿主相同或相似的多种生物学活性,我国幅员辽阔、地大物博、气候适宜等良好外在条件更造就了丰富多样的内生真菌资源,关于药用植物内生真菌资源的研究有待被不断开发。目的:通过对药用植物日本鸢尾(Iris japonica)进行分离培养来初步探索其是否具有内生真菌资源,同时对纯化后的内生真菌菌株进行鉴定,以及内生真菌次级代谢产物的抗菌活性分析,以此来不断发现和丰富我国药用植物内生真菌资源。方法:首先对药用植物日本鸢尾进行表面消毒,组织剪切分离后开始恒温培养,对培养出的内生真菌菌株进一步分离纯化;肉眼以及染色显微镜检方法观察菌落形态、菌丝、孢子结构等性状,对不产生孢子菌株通过更换培养基、低温处理、紫外灯照射、间歇光照方法诱导产生孢子,从传统形态学方面对内生真菌进行初步鉴定;对菌落形态典型菌株采用PCR扩增内生真菌的ITS序列,将测序得到的ITS序列结果提交至NCBI数据库中,通过BLAST比对选出与该序列相关性较高的核酸序列,利用软件MEGA-10.0采用邻接法(Neighbor-joining NJ)构建系统进化树,对相关内生真菌种属类别予以进一步分类鉴定;最后采用酶标仪快速检测法与琼脂平板打孔法对鉴定出的内生真菌发酵上清液进行抗菌活性分析。结果:从药用植物日本鸢尾的根、茎、叶组织块中共分离出68株内生真菌,定殖率分别为74.07%、79.16%、86.95%,分离率分别为85.18%、66.66%、42.02%,经纯化鉴定为5种,分别为橘青霉(Penicillium citrinum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、肉色隔孢伏革菌(Peniophora incarnata)、小新壳梭孢菌(Neofusicoccum parvum)、叶点霉属的Phyllosticta capitalensis(有性型为球座菌属(Guignardia)),日本鸢尾内生真菌对宿主具有一定的组织专一性,其中根中以橘青霉和尖孢镰刀菌为主,茎中以小新壳梭孢菌为主,叶中以橘青霉和肉色隔孢伏革菌以及叶点霉属的Phyllosticta capitalensis为主;在4种诱导方法中低温处理对孢子产生效果最佳;未发现五株典型内生真菌发酵上清液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白假丝酵母菌有明显抑菌活性。结论:从药用植物日本鸢尾中成功分离鉴定出5种内生真菌,为药用植物内生真菌的开发和利用提供了一定基础。