过氧乙酸对鲍曼不动杆菌消毒灭菌作用的实验研究

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目的观察消毒剂过氧乙酸(PAA)对鲍曼不动杆菌(A.baumannii)消毒后的活菌培养计数,探讨该消毒剂对A.baumannii的杀菌效果,同时过氧乙酸可能的杀菌机制。材料和方法采用实验室贮存的鲍曼不动杆菌,将其制成菌悬液,先用细菌浓度比浊测定法粗测其含菌浓度,然后以稀释液稀释至1×10~8 cfu/ml-5×10~8cfu/ml。3%牛血清白蛋白组54株鲍曼不动杆菌,0.3%牛血清白蛋白组8株鲍曼不动杆菌。采用二元包装过氧乙酸溶液,A液和B液以10:8(体积比)混匀,密闭放置24小时、48小时、72小时分别用碘量法测定其浓度,用无菌硬水配制过氧乙酸稀溶液。参照消毒技术规范进行中和剂鉴定实验,选择3g/l硫代硫酸钠+10g/l吐温-80作为中和剂。取消毒试验用试管,先加入0.5ml鲍曼不动杆菌悬液,再加入0.5ml有机干扰物(0.3%牛血清白蛋白,3%牛血清白蛋白),置20℃±1℃水浴中5min后,用无菌吸管吸取过氧乙酸4.0ml注入其中,迅速混匀并立即计时,待作用至预定时间,用数字可调移液器吸取0.5ml上述混合液加入4.5ml经灭菌的中和剂中,混匀作用10min后,吸取1.0ml样液加于无菌培养皿中(每管样液接种2个培养皿),将冷至40℃-45℃的胰蛋白胨大豆琼脂培养基15ml倾注于已加入样液的培养皿中。待琼脂凝固后,置37℃的温箱内培养48小时,计数菌落数。试验分为3个过氧乙酸浓度组:0.005%(50mg/l),0.01%(100mg/l),0.02%(200mg/l)以及5个作用时间(1min,3min,5min,15min,30min)。同时设立对照组:用稀释液代替消毒液,进行平行试验,作为阳性对照,所得结果代表菌液原有浓度,以作为计算杀灭对数的初始浓度。试验均重复3次,计算各组的活菌浓度(cfu/ml)。结果1、过氧乙酸的含量:过氧乙酸A液和B液以10:8(体积比)混匀,密闭放置24小时、48小时、72小时后其含量分别为182g/l、194g/l、188g/l。2、中和剂鉴定试验:采用0.02%过氧乙酸和3%牛血清白蛋白,中和剂3g/l硫代硫酸钠+10g/l吐温-80,第1组无细菌,第2组菌落数158 cfu/ml,第3组菌落数56625000 cfu/ml,第4组菌落数57292000 cfu/ml,第5组菌落数60080000 cfu/ml,第6组无菌生长,第3、4、5组的组间菌落数误差率为2.4%。3、3%牛血清白蛋白作为有机干扰物的各试验组的比较:三种浓度过氧乙酸杀菌效果有显著差异(P<0.01);0.005%过氧乙酸与0.01%过氧乙酸杀菌效果比较:0.01%过氧乙酸明显增高(P<0.01);0.005%过氧乙酸与0.02%过氧乙酸杀菌效果比较:0.02%过氧乙酸明显增高(P<0.01);0.01%过氧乙酸与0.02%过氧乙酸杀菌效果比较:0.02%过氧乙酸明显增高(P<0.01)。4、0.3%牛血清白蛋白作为有机干扰物的各试验组的比较:三种浓度过氧乙酸杀菌效果有显著差异(P<0.01);0.005%过氧乙酸与0.01%过氧乙酸杀菌效果比较无明显差异(P>0.05);0.02%过氧乙酸的杀菌效果明显比0.005%过氧乙酸增高(P<0.01);0.01%过氧乙酸与0.02%过氧乙酸杀菌效果比较:0.02%过氧乙酸明显增高(P<0.01)。5、3%牛血清白蛋白和0.3%牛血清白蛋白有机干扰物作用下的杀菌效果的比较:0.005%过氧乙酸的杀菌效果,3%牛血清白蛋白组明显低于0.3%牛血清白蛋白组(P<0.01);0.01%过氧乙酸的杀菌效果,3%牛血清白蛋白组与0.3%牛血清白蛋白组无明显差异(P>0.05);0.02%过氧乙酸的杀菌效果,3%牛血清白蛋白组与0.3%牛血清白蛋白组比较无明显差异(P>0.05)。结论1、过氧乙酸浓度0.005%-0.02%范围内,随着浓度的提高,灭菌效果逐渐增高。2、对医院物品和器械进行消毒时选择0.01%过氧乙酸作用5分钟或0.02%过氧乙酸作用1分钟可达到满意灭菌效果;0.01%过氧乙酸作用10分钟或0.02%过氧乙酸作用5分钟可达到灭菌状态。3、有机干扰物(牛血清白蛋白)可影响低浓度(0.005%)过氧乙酸的杀菌效果,但对高浓度(0.01%,0.02%)过氧乙酸杀菌效果没有明显影响。应用所研究的消毒剂于临床,评估对鲍曼不动杆菌的效果,以达到指导临床工作,降低感染率、缩短病人平均住院天数、减少病人的费用,减少不动杆菌耐药菌株在病人中的传播,预防和控制暴发流行。
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