第一部分VEGF导致肿瘤恶液质的实验研究 背景恶液质是肿瘤常见的并发症，临床表现为厌食乏力、进行性体重下降、消瘦、贫血等全身衰竭症状。近50％的晚期肿瘤患者会出现恶液质(Cancer-associated systemic syndrome，CASS)，20％的肿瘤患者直接死于恶液质。在上消化道实体瘤和肺癌中，恶液质尤为常见，85％胃癌患者、61％非小细胞肺癌患者会出现恶液质。恶液质往往与较低的生活质量和较差的预后相关，并可以对肿瘤的治疗产生抵抗。到目前为止，有关肿瘤恶液质的发病机制仍未完全阐明。 目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)与荷瘤小鼠肿瘤恶液质的相关性。 方法：将鼠源性纤维肉瘤细胞T241-VEGF和T241-Vector注射至小鼠背侧皮下。随着移植瘤生长，每2天测量小鼠体重和皮下肿瘤大小，待皮下肿瘤体积达到2.0cm3处死小鼠。记录生存时间，检测血红蛋白和红细胞计数，测定血清hVEGF含量，HE染色观察肝脏、脾脏、肾上腺、骨髓结构，共聚焦显微镜观察皮下移植瘤的血管形态学改变。 结果：与Vector组比较，VEGF组移植瘤生长速度较快，疾病晚期荷瘤小鼠的体重明显下降。大体观察，VEGF组小鼠出现显著的贫血表现，无毛区域包括口周、鼻及爪部均见明显苍白，肝脾显著肿大(P<0.05)，生存率明显下降(P<0.05)。血清VEGF含量检测示健康组为0，Vector组为0.02±0.005 ng/ml，VEGF组高达1.12±0.10ng/ml，提示T241-VEGF荷瘤小鼠外周血中VEGF呈高表达(P<0.01)。VEGF组小鼠红细胞和血红蛋白与健康组相比，显著下降(P<0.01)；与Vector组相比，有明显降低(P<0.05)。组织学检查：VEGF组小鼠的肝脏组织水肿，小叶结构欠清晰，肝血窦及中央静脉扩张；脾脏肿大并见髓质内血窦扩张；肾上腺皮质结构疏松，血管间隙扩大。骨髓中造血细胞稀少，巨核细胞减少，骨髓间质血管扩张。VEGF组小鼠的皮下移植瘤血管形态呈现原始、扩张的窦状隙结构，血管丛表现为紊乱无序、扭曲、内部相互交通。 结论：肿瘤分泌的VEGF作用于荷瘤小鼠的多种组织和器官，表现为典型恶液质症状。提示VEGF参与肿瘤恶液质的发生和进展，两者具有相关性。 第二部分Bevacizumab逆转VEGF导致的肿瘤相关性恶液质 背景：以往研究表明，肿瘤分泌的VEGF进入外周血循环，可以导致肿瘤相关性恶液质的发生。荷瘤小鼠出现严重的贫血表现，多脏器形态和功能受损，肝脾显著肿大，生存率明显下降。但是肿瘤分泌的血管生成因子是否直接导致肿瘤相关性恶液质的发生仍有待证实。贝伐单抗是第一个人源化的抗VEGF单克隆抗体类药物，通过抑制人类血管内皮生长因子的生物学活性而起作用。本研究旨在验证贝伐单抗治疗能否逆转肿瘤相关性恶液质。 目的：通过观察抗VEGF抗体贝伐单抗对恶液质小鼠的治疗作用，验证VEGF与肿瘤恶液质直接相关。 方法：将20只恶液质模型小鼠随机分为2组，bevacizumab组与对照组各10只小鼠。分别予人源化的抗VEGF抗体贝伐单抗(bevacizumab)5 mg/kg及平衡缓冲液各0.1 ml腹腔注射，每周2次，对照组小鼠皮下移植瘤长至2.0 cm3为实验终点。处死剩余小鼠，记录生存时间，称重肝脏和脾脏，检测外周血红蛋白和红细胞计数。 结果：治疗开始时两组荷瘤小鼠均出现轻微的贫血表现，外周血红蛋白和红细胞无明显差异。治疗10天后，治疗组贫血明显改善，生存期延长，皮下移植瘤生长延缓，肝脾未出现肿大。而对照组50％小鼠死亡，贫血严重，肝脾肿大。对照组红细胞计数和血红蛋白水平均显著降低，而贝伐单抗组则有所上升，两者差异显著(P<0.01)。 结论：抗VEGF抗体(贝伐单抗)能逆转VEGF高表达所致的贫血和肝脾肿大，移植瘤生长延缓，荷瘤小鼠生存期延长。提示VEGF在参与肿瘤相关性恶液质的发生。 第三部分肿瘤相关性贫血：VEGF作用机制的实验研究 背景：贫血是肿瘤相关性恶液质的一个重要指标，也是恶性肿瘤患者常见的并发症之一，可引起全身各系统的损害，导致乏力、嗜睡、呼吸困难等症状的发生，直接影响生活质量。 目的：初步探讨VEGF导致肿瘤相关性贫血的作用机制。 方法：将鼠源性纤维肉瘤细胞T241-VEGF和T241-Vector注射至小鼠背侧皮下，建立小鼠移植瘤模型。观察小鼠一般表现，每2周检测外周血中血红蛋白和红细胞计数，第32天VEGF组小鼠出现明显贫血后处死小鼠。称重肝脏和脾脏，测定血清VEGF含量，肝脾脏分别HE染色和CD31染色观察血管形态，骨髓石蜡包埋后做HE染色，TUNEL技术进行骨髓细胞凋亡的原位检测。流式细胞仪检测新鲜骨髓中CD45+的成熟造血细胞和CD133+造血干细胞。 结果：VEGF组小鼠贫血模型中，外周血的红细胞和血红蛋白与健康组相比，显著下降(P<0.01)；与Vector组相比，有明显降低(P<0.05)。血清VEGF含量检测示健康组为0，Vector组为0.02±0.005 ng/ml，VEGF组高达1.12±0.10ng/ml(P<0.01)。VEGF组小鼠出现肝脾充血肿大，肝脾内血管扩张。TUNEL法检测凋亡的骨髓细胞，VEGF组比Vector组和健康组小鼠明显增多(P<0.05)。流式细胞仪检测新鲜骨髓中CD45+的成熟造血细胞和CD133+造血干细胞，VEGF组与其它两组比较，均显著下降(P<0.01)。 结论：肿瘤分泌的VEGF作用于荷瘤小鼠的造血器官骨髓和髓外造血器官肝脏、脾脏。由于血管扩张、通透性增加，导致肝脾充血肿大，骨髓造血细胞减少，凋亡细胞增多，外周血红细胞和血红蛋白下降，导致贫血。