新疆药用植物沙枣活性多肽的提取分离与制备工艺研究

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沙枣主要分布在我国西北各省区和内蒙古西部;沙枣,别名:桂香柳、七里香等,拉丁文名Elaeagnus angustifolia L,英文名为Oleaster,维吾尔名为结格代,胡颓子科、胡颓子属落叶乔木或小乔木。据新疆药用植物志记载,中国有狭叶沙枣、准噶尔沙枣、砂生沙枣和尖果沙枣等四个品种;其中准噶尔沙枣和砂生沙枣为新疆特有的品种。  沙枣是一种新疆维吾尔族人民喜爱的果品,新疆资源丰富。在维吾尔药中,沙枣果实主要用于治疗脾胃虚弱,头痛,胃病,热性咳嗽,腹泻消化不良,腹泻痢疾等;据《维药志》记载,沙枣花主要用于治疗胸闷气短,胃腹胀痛,咳嗽,食欲不佳以及关节炎和肌无力。目前沙枣在维吾尔医临床上常用于治腹泻痢疾。  本论文,以新疆乃至干旱地区特色植物沙枣果实和种子(果仁)为研究对象,以抗菌活性为导向,对其进行系统的多肽类化合物提取分离、纯化和抗菌、抗氧化活性筛选;同时,结合离子交换色谱、双向电泳和液/质联用色谱技术(LC/MS),解释了有效部位的成分,并通过多肽库对比推断了多肽的氨基酸序列,并建立了有效部位的制备工艺。  本论文主要研究内容具体如下:  1.沙枣果实利用50%乙醇溶液提取,C18反相硅胶柱(I.D.21.6 x H126,45 ml)分离SZGS30、SZGS50和SZGS70等三个部位,通过活性筛选和蛋白含量比较,将SZGS50部位进一步使用阴离子交换树脂、HPLC制备色谱分离纯化得到J1、J2和J3等三个多肽部位。  活性筛选结果证实,这三个多肽具有很好抗菌和清除DPPH自由基的活性;其中J1多肽清除DPPH自由基的作用最强,抑制浓度(IC50)的值为87.0μg/mL,其余两个多肽的IC50值分别为98.3μg/mL(J3)和110.7μg/mL(J2)。抗菌活性结果显示,J1,J2,J3三个多肽都均有Prot.Vulgaris的抑菌作用,抑制圈直径分别为22.0mm(J2)、19.0mm(J1)和20mm(J3),其中J2多肽对Prot.Vulgaris抑制作用最好。  2.根据沙枣蛋白质的溶解性,沙枣种子(果仁)选用10%醋酸提取溶液提取、丙酮沉淀提取物中的多肽类化合物,测总蛋白含量为72.6%,分别测对白色念珠菌,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用,抑菌圈直径分别为7.5mm、8mm和9mm。采用双向电泳和液/质联用色谱技术(LC/MS)相结合的方法分离纯化提取的粗体多肽类物质,共得到了分子量分别为2837Da、4400.5Da、5092.9Da和6551.5Da四个单体多肽,并且根据拟合的二级质谱图成功的鉴定部分肽段序列,序列依次为NH2-YQQEAEGQQR-,NH2-YQEEKQQQR-NH2-VQVVDNYGQSVFDGEVR-和NH2-KQDITITGASTLPGDEVER-。  3.最后采用单因素实验(料液比、提取时间、提取次数和乙醇浓度对提取多肽的量的影响)和正交试验,确定了沙枣种子(果仁)多肽的最佳提取工艺路线,通过综合分析正交实验结果,乙醇提取沙枣果仁多肽的最佳工艺条件为提取次数2、提取时间6h、乙醇浓度50%、料液比为1∶6。通过对沙枣种子多肽进行抗白色念珠菌,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作用的研究,结果表明利用此提取工艺条件并没有影响所提取的沙枣种子多肽抗菌作用。
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