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目的探究调节性B细胞(Breg)各亚群与肾移植受者免疫稳态的相关性,进一步检测肾移植受者免疫稳态下Breg各亚群的变化规律及其临床价值。方法1.收集郑州大学第一附属医院收治的25名肾移植术后肾功能稳定(ST)患者和18名抗体介导排斥反应(AMR)患者外周血和移植肾穿刺标本,以健康供体(HD)作为对照进行巢式病例对照研究,了解记忆性Breg(mBreg)、过渡态Breg(tBreg)、IL-10+mBreg和IL-10+tBreg 4种Breg亚群在维持免疫稳态中的作用。2.收集HD组供体术前外周血和部分移植前供肾穿刺活检组织的解离细胞、ST组患者术后90天外周血和部分移植肾穿刺活检组织的解离细胞、AMR组患者抗排斥治疗前外周血和部分移植肾穿刺活检组织的解离细胞,运用流式细胞术检测不同免疫状态下4种Breg亚群的表达,分析4种Breg亚群与肾移植受者免疫稳态的相关性。3.收集HD组供体术前,术后1天,7天,14天的外周血以及ST组患者术前,术后1天,7天,14天,30天,90天外周血,流式细胞术检测4种Breg亚群的动态变化,分析4种Breg亚群在ST组患者外周血中变化规律及其临床价值。结果1.AMR组C4d活检阳性率、DSA水平(尤其是抗Ⅱ类DSA)以及肾小管炎、间质炎症、肾小管周围毛细血管炎、微血管炎症的评分均高于ST组(所有 P<0.05)。2.HD组供体术前、ST组患者术后90天、AMR组患者抗排斥治疗前外周血单个核细胞(PBMCs)流式检测结果显示,B细胞占PBMCs的百分比、mBreg和tBreg占B细胞的百分比差异均无统计学意义(所有P>0.05)。然而,ST组和HD组IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占B细胞的百分比都明显高于AMR组(所有 P<0.05)。3.运用受试者操作特性(ROC)曲线方法对ST组患者术后90天、AMR组患者抗排斥治疗前外周血Breg占B细胞的百分比进行分析,我们发现,相对于mBreg和tBreg占B细胞的百分比指标,IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占B细胞的百分比指标对区分移植肾功能稳定和AMR发生具有更好的鉴别能力。4.HD组供体术前、ST组患者术后90天、AMR组患者抗排斥治疗前移植肾组织解离细胞流式分析结果显示,AMR组IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占白细胞的比例明显高于ST组和HD组(所有P<0.05)。5.ST组患者术前,术后1、7、14、30和90天以及HD组供体术前,术后1、7和14天外周血PBMCs流式检测的动态结果显示,一方面,HD组与ST组mBreg或tBreg占B细胞百分比在术前、术后1天、7天和14天均没有统计学差异(所有P>0.05);然而,HD组IL-10+mBreg或IL-10+tBreg占B细胞百分比在术后1天、7天和14天均显著低于ST组(所有P<0.05)。另一方面,在ST组中,mBreg和tBreg占B细胞百分比仅在术后7天、14天、30天和90天高于术前(所有P<0.05),但是IL-10+mBreg或IL-10+tBreg占B细胞百分比在术后1天、7天、14天、30天和90天均显著高于术前(所有P<0.05)。结论1.AMR组移植肾损害程度高于ST组可能与高C4d 阳性率和抗Ⅱ类DSA水平有关。2.外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg的减少与肾移植AMR发生密切相关,移植肾稳定状态与外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg的增加密切相关。3.检测外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占B细胞的比例有助于区分移植肾稳定状态与AMR,具有良好的诊断与鉴别价值。4.ST组患者移植肾组织解离细胞中IL-10+mBreg和IL-10+tBreg均少于AMR组,提示检测外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg相较于移植肾中IL-10+mBreg和IL-10+tBreg更适合用于评估移植稳态。5.ST组患者在术后90天内外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg占B细胞的比例一直高于术前,进一步表明外周血IL-10+mBreg和IL-10+tBreg在移植肾稳态中发挥重要作用,是评估肾移植术后稳定状态的潜在指标。