【摘 要】
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目的巨噬细胞是一类固有免疫细胞,在机体免疫应答及炎症反应中发挥重要作用。微环境可影响巨噬细胞功能,迄今尚未见有关渗透压调控其功能的报道。本课题观察低渗环境对小鼠骨
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目的巨噬细胞是一类固有免疫细胞,在机体免疫应答及炎症反应中发挥重要作用。微环境可影响巨噬细胞功能,迄今尚未见有关渗透压调控其功能的报道。本课题观察低渗环境对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)的影响,并初步探讨其分子机制。方法低渗环境刺激BMDM,观察如下指标：1. BMDM吞噬能力的改变(对FITC标记的葡聚糖及IgG包被的乳胶颗粒的吞噬功能)。2. BMDM抗原提呈能力的改变(流式细胞术检测BMDM表面CD80/86、 MHCⅡ分子表达)。3. ELISA检测BMDM分泌炎性细胞因子(IL-10、TNF-α)的改变。4. RT-PCR和Western blot检测ClC-2(voltage-gated chloride channel)、 ClC-3mRNA及蛋白表达；免疫荧光技术检测蛋白在细胞内分布。5.用siRNA沉默ClC-3,观察对低渗调控BMDM吞噬功能的影响。结果1.微环境低渗可明显增强BMDM对FITC标记的葡聚糖及IgG包被的乳胶颗粒的吞噬能力。2.低渗环境对BMDM抗原提呈功能(CD80/86、MHCⅡ分子表达水平)无明显影响3.低渗对BMDM分泌IL-10、TNF-α无明显影响4.C1C-3在未受刺激的BMDM内均匀、弥散分布于胞浆。低渗刺激对BMDM内C1C-3蛋白表达水平无明显影响,但C1C-3逐渐向细胞膜聚集。5.应用siRNA沉默CIC-3基因,则低渗增强BMDM吞噬能力的作用明显降低,提示低渗环境增强BMDM吞噬的作用依赖于C1C-3参与。结论1.微环境低渗可上调BMDM吞噬能力。2.微环境低渗上调BMDM吞噬能力的作用有赖C1C-3参与。
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