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目的:1.用新生鼠建立HIBD模型后给予多肽Tat-k13及对照肽Tat-K3R处理,观察多肽Tat-k13对HIBD模型鼠空间记忆能力及神经元生长的影响及HIBD后NEDD4相关蛋白水平的变化;2.进一研究NEDD4在介导缺氧缺血后PTEN核转移中的作用。方法:1.采用7日龄新生SD大鼠,随机分为SHAM组和HIBD组。HIBD组造模后随机分为生理盐水处理组(HIBD+Saline)、多肽处理组(HIBD+K13)、对照多肽处理组(HIBD+K13R),分别于缺氧后0h、3h、24h、48h各腹腔注射一次生理盐水或多肽。4-5周行水迷宫试验和Golgi染色实验。HIBD模型建立后分别于缺氧后3h、6h、12h、24h、3d及7d这几个不同的时间点于冰上分离左侧海马,提总蛋白后用免疫印迹方法检测不同时间点NEDD4相关蛋白水平变化。2.培养第14天的原代神经元给予NMDA(25u M/L)处理,然后提总蛋白检测NEDD4-1蛋白水平。并用NEDD4-1 si RNA干预SY5Y cell后提核蛋白,检测总蛋白中NEDD4-1和核蛋白中PTEN蛋白水平的变化。结果:1.水迷宫试验检测空间记忆提取能力:与SHAM组相比,HIBD组平台所在象限的时间明显较短,穿越平台的次数明显较少,第一次上平台时间明显较长。给予Tat-K13后能部分逆转。Golgi染色观察神经元生长:与SHAM组相比HIBD组神经元较少,但是K13处理组比HIBD组神经元多。HI后3h-12h总蛋白P34和NEDD4-1蛋白表达降低,NEDD4-2蛋白水平升高,24h后几乎回复到对照组水平。2.NMDA处理原代皮层神经元后总蛋白中NEDD4-1表达降低,NEDD4-1 si RNA转染SY5Y cell后核蛋白中PTEN水平增加。结论:1.HIBD损伤空间学习记忆和神经元生长,而多肽Tat-k13能部分逆转这种损伤;HIBD后总蛋白P34和NEDD4-1蛋白表达降低而NEDD4-2蛋白表达增高;2.NEDD4-1介导PTEN核转移。目的:将老鼠置于高台上建立急性应激模型,观察氟西汀对应激易化海马CA1区LTD以及应激引起的空间记忆提取能力损伤的影响。方法:将200-250g的SD大鼠置于高台上让其保持清醒30min模拟急性应激模型。分别于急性应激前、急性应激后马上给予氟西汀处理,或取脑组织切片后用含有氟西汀的人工脑脊液孵育脑片进行电生理实验观察氟西汀对应激易化的海马CA1 LTD的影响。同样建立应激模型后进行水迷宫试验:先不分组训练6天,训练后24h进行测试。测试时分成2组:无应激对照组(non-stress)和应激组(stress)。为了观察氟西汀对空间记忆提取能力的影响,stress组又随机分成3组。应激前给予氟西汀处理组(Fluoxetine+stress),应激后立即给予氟西汀处理组(stress+Fluoxetine),生理盐水处理组(Stress+saline)。结果:1.急性应激前给予氟西汀处理能抑制应激易化海马CA1区LTD;2.急性应激后立即给予氟西汀处理对应激易化海马CA1区LTD没有影响;3.氟西汀孵育脑片对急性应激易化海马CA1区LTD没有影响;4.急性应激前给予氟西汀处理能预防应激引起的空间记忆提取能力的受损。结论:急性应激前给予氟西汀处理能够抑制急性应激易化海马CA1区LTD并能逆转急性应激引起的空间记忆提取能力的损伤。