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本文考察了兼性厌氧菌klebsiella pneumoniae生产1，3-丙二醇所涉及的三种关键酶甘油脱水酶、甘油脱氢酶和1，3—丙二醇氧化酶的酶活测定方法，优化了酶的发酵生产条件，研究了甘油脱氢酶和1，3—丙二醇氧化酶的分离纯化，为实现多酶催化反应体系生产重要化工产品1，3—丙二醇奠定了基础。 文中首先从处理时间和振幅出发考察了超声波细胞破碎释放胞内酶的最适条件，然后通过考察温度、pH对酶的活性的影响，确定了酶活测定最佳条件，为接下来的纯化工作建立了一个可靠、灵敏的检测手段。 考察了多种碳源、有机氮源、无机氮源和无机盐对酶发酵生产的影响，选择对酶有促进作用的五种组分，采用均匀设计法U15（155）安排培养基优化方案，交替使用遗传算法和人工神经网络模型寻优，得到优化的培养基组分为（单位：g／l）甘油30，氯化钾1.6，氯化铵6.7，氯化钙0.28，酵母浸膏2.8。在此方案基础上，通过对发酵影响较大的因素如接种量、温度、pH、摇床转速和培养时间等条件的考察，确定了发酵最佳条件为：温度37℃，初始pH7.0，摇床转速200rpm，接种量5％，发酵时间为24小时。在该条件下得到的甘油脱氢酶、1，3—丙二醇氧化酶和甘油脱水酶活力水平分别为对照组的2.24倍、1.59倍和1.5倍。 采用Q Sepharose Fast Flow离子交换和Blue Sepharose CL-6B亲和层析两步法对甘油脱氢酶和1，3—丙二醇氧化酶进行分离，确定了层析分离所适宜的缓冲液pH值，得到纯化倍数为12倍，比活为49U／mg，收率为66％的甘油脱氢酶和纯度提高5倍，比活为31.5U／mg，收率为12％的1，3—丙二醇氧化酶。 最后，本文考察了甘油脱氢酶和1，3—丙二醇氧化酶的动力学性质。确定了米氏常数、考察了酶的底物专一性，研究了金属离子和温度、pH对酶活力的影响，为建立酶法生产1，3—丙二醇提供了依据。