【摘 要】
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目的:通过采用JNK的特异性抑制剂SP600125,观察离体海马脑片氧糖剥夺模型中神经兴奋性变化及ENT1表达情况,进而探讨JNK调控ENT1参与离体海马脑片氧糖剥夺损伤的可能机制。方法:出生7 d的SD大鼠海马脑片制备,实验分为正常对照组、模型组及抑制剂组,每组各12只。正常组不经过氧糖剥夺(OGD)处理;模型组经OGD处理30 min;抑制剂组经OGD处理30min的同时加用10μmol/L
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目的:通过采用JNK的特异性抑制剂SP600125,观察离体海马脑片氧糖剥夺模型中神经兴奋性变化及ENT1表达情况,进而探讨JNK调控ENT1参与离体海马脑片氧糖剥夺损伤的可能机制。方法:出生7 d的SD大鼠海马脑片制备,实验分为正常对照组、模型组及抑制剂组,每组各12只。正常组不经过氧糖剥夺(OGD)处理;模型组经OGD处理30 min;抑制剂组经OGD处理30min的同时加用10μmol/L SP600125。Western Blot检测不同组别离体海马脑片的JNK总蛋白(t-JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、ENT1蛋白的表达水平;全细胞膜片钳电流钳模式检测不同组别海马脑片神经元的膜电位及动作电位变化,电压钳模式下观察神经元兴奋性突触后电流的变化情况。结果:1.膜片钳电流钳模式监测膜电位及动作电位结果:对照组神经元膜电位处于静息状态,模型组中,神经元膜电位绝对值下降,与对照组相比有统计意义(P<0.05);抑制剂组中,神经元膜电位绝对值上升,与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。模型组动作电位(AP)频率加快,与对照组相比有统计学意义(P<0.05),在抑制剂组中,动作电位(AP)频率减慢,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。2.膜片钳电压钳模式监测兴奋性突触后电流的结果:模型组中,兴奋性突触后电流幅值(eEPSC)升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);抑制剂组中,兴奋性突触后电流幅值(eEPSC)下降,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。3.Western Blot结果:在对照组的离体海马脑片中,t-JNK、p-JNK及ENT1均有基础表达;而在对照组及抑制剂组中,t-JNK的表达与模型组相比均无统计学意义(P>0.05);在模型组中,p-JNK表达升高,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);在抑制剂组中,p-JNK表达下降,与模型组相比有统计学意义(P<0.05);在模型组中,ENT1表达显著上升,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);在抑制剂组中,ENT1表达明显下降,与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:在离体海马脑片氧糖剥夺模型中,通过JNK的抑制剂SP600125作用后,可降低ENT1表达水平,减轻神经兴奋性毒性。
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