甲基莲心碱增强伊马替尼对CML原代细胞的抑制作用及机制

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目的:研究甲基莲心碱(Nef)增强伊马替尼(ST1571)对CML原代细胞的细胞毒作用并探讨Nef化疗增敏的机制   方法:采用改良四唑盐法(MTT)筛选甲基莲心碱的无毒浓度;高逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,蛋白质免疫印迹(Wlestern-Blotting)法检测Nef对CML原代细p210Bcr-abl融合基因和融合蛋白表达的影响。   结果:(1)Nef16、32、64μmol·L-1均对CML原代细胞有抑制细胞增殖的作用,随着浓度的增加,作用也增强(P<0.05)。Nef8μmol·L-1,4μmol·L-1;As2O32μmol·L-1,1μmol·L-1为对CML原代细胞均无明显毒性作用的浓度。Nef4μmol·L-1、Nef8μmol·L-1各组药物联用STI571后均不同程度的降低CML原代细胞对STI571的IC50值,由原来的0.70±0.10μmol·L-1分别降至0.32±0.06和0.16±0.02,增敏倍数分别为原来的2.19和4.38倍。(2)经伊马替尼和Nef联合处理的CML原代细胞(0.5700±0.1383)较单独使用伊马替尼处理的CML原代细胞p210Bcr-alb融合基因表达(0.7111±0.1152)降低(P<0.05);分别经Nef(8μmol·L-1)、Nef(4μmol·L-1),As2O3(2μmol·L-1)处理48h后,CML原代细胞p210Bcr-abl融合基因表达均较未经药物处理组CML原代细胞p210Bcr-abl融合基因表达差异无统计学意义(P>0.05);单独使用伊马替尼(1μmol·L-1)处理的CML原代细胞(0.7111±0.1152)较未经药物处理组CML原代细胞p210Bcr-abl融合基因表达(0.9305±0.0241)降低(P<0.05);(3)经伊马替尼和Nef联合处理的CML原代细胞(0.6319±0.0572)较单独使用伊马替尼处理的CML原代细胞p210Bcr-abl融合蛋白表达(0.7824±0.0105)降低(P<0.05);分别经Nef(μmol·L-1)、Nef(8μmol·L-1)处理48h后,CML原代细胞p210Bcr-abl融合蛋白表达均较未经药物处理组CML原代细胞p210Bcr-abl融合蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);经As203(2μmol·L-1),STI571(1μmol·L-1)处理48h后,CML原代细胞Bcr-abl融合蛋白表达均较未经药物处理组CML原代细胞p210Bcr-abl融合蛋白表达降低(P<0.05),且经As2O3(2μmol·L-1)处理的CML原代细胞p210Bcr-abl融合蛋白表达与经STI571(1μmol·L-1)处理的CML原代细胞p210Bcr-abl融合蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。   结论:(1)甲基莲心碱对CML原代细胞有抑制增殖的作用,且与剂量有关。   (2)甲基莲心碱在无毒剂量下可以增强STI571对CML原代细胞的细胞毒作用。   (3)甲基莲心碱可以增强伊马替尼对CML原代细胞p210Bcr-abl融合基因表达的下调作用和p210Bcr-abl融合蛋白的特异性的抑制作用。
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