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背景随着社会的发展和人们饮食生活结构的变化,脑血管病（cerebrovascular disease,CVD）的发病几率日益上涨,由于其致残率以及死亡率都较高,对家庭而言不但需要承受经济的重压,而且在心理及精神方面也会倍受折磨,而对于社会而言,则是一种重大的包袱,已成为一个亟待解决的社会健康问题[1]。近年来我国的数据统计显示,脑血管病成为死亡的第二大病因,其中缺血性脑血管病（ischemic cerebrovascular disease,ICVD）高达80%[2],因此研究此疾病的发病原因及机制、探寻优良的治疗方案刻不容缓。由于缺血性脑血管病的危险因素较为复杂,人们对于其发病因素的认知尚不完善,目前己知的病因包括高血压、糖尿病、高血脂、吸烟、肥胖、胰岛素抵抗等[3]。缺血性脑血管疾病的发病因素众多,其中高同型半胱氨酸血症（hyperhomocysteinemia,HHcy）作为其中因素之一在近年来被广泛研究[4]。脑血管疾病有单基因遗传,也有多基因遗传病,发病机制非常复杂,与遗传、环境等众多因素相关。目前基因因素已经成探讨缺血性脑血管病发病机制的研究热点之一,更有研究表明,遗传因素是脑血管疾病发病率的主要影响因素,而吸烟、饮酒等环境因素仅可增加脑血管疾病的发病率[2]。而在众多基因因素对缺血性脑血管病发病机制影响的研究中,同型半胱氨酸（Hcy）相关代谢酶基因多态性在缺血性脑血管病发病机制中的作用备受关注[5]。同型半胱氨酸的代谢涉及多种代谢酶及辅因子的参与,包括胱硫醚β合成酶（CBS）、N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、甲硫氨酸合成酶（MS）、甲硫氨酸合成还原酶（MTRR）等。在叶酸代谢期间,Hcy在CBS、MS和MTRR的催化作用下转化为半胱氨酸或甲硫氨酸,Hcy在血浆中的水平受CBS、MS和MTRR酶活性的调节,因而Hcy相关代谢酶已成为脑血管疾病的重要风险因素。丝氨酸羟甲基转移酶（SHMT）在叶酸代谢期间可逆性地催化丝氨酸和四氢叶酸到甘氨酸和甲基四氢叶酸的合成,参与生物体诸多甲基化反应,其与甲基化、DNA合成及Hcy代谢密切相关[6]越来越多的证据证明Hcy的代谢相关酶MS、MTRR和MTHFR等遗传性缺陷致酶活性降低可能是引起HHcy的重要原因之一[7,8]。如目前研究比较多的Hcy代谢相关酶MTHFR,其纯合基因突变引起酶活性降低,其中667位C-T的基因突变最常见,编码的氨基酸由丙氨酸变为缬氨酸[9]。另外,CBST833C及CBS844ins68的基因多态性也被证明与脑血管疾病患者的Hcy升高有关[10]。Ferraresi等发现,MS2756位的D919G突变常见于一般人群中,且其突变可能会引起HHcy而增高心、脑血管疾病的发病风险[11]。这些研究都显示Hcy相关酶基因多态性与缺血性脑血管疾病具有显著相关性,然而仍有许多不明了之处尚需更多的研究进行探索。维生素B6是丝氨酸羟甲基转移酶SHMT、胱硫β合成酶CBS等酶的辅酶,是重要辅助因子,对此类Hcy代谢相关酶的催化活性起着非常重要的作用,在脑血管疾病的发生发展过程中亦发挥重要作用[7],然而目前对于这些因素在脑血管疾病中如何发挥作用并不不十分明了。并且之前的研究并没有将维生素B6的水平与Hcy相关代谢酶基因多态性结合起来。因此本研究旨在在前有探究成果的基础上,深度探讨Hcy代谢途径相关酶基因多态性在脑血管疾病中起到的效用。进一步研究了Hcy代谢酶相关基因多态性在维生素B6干预过程中扮演的角色,前瞻性的探讨了维生素B6与Hcy相关代谢酶基因多态性的关系及其在缺血性脑血管病中的作用。目的探讨Hcy相关酶基因CBS C1080T、MS A2756G、MTRR A66G、SHMT C1420T基因多态性及维生素B6对Hcy代谢的影响,探索上述因素与缺血性脑血管病的关系,寻找缺血性脑血管病易感基因,为其防治提供理论依据。方法选取2012年10月到2014年12月在河南省新乡市中心医院神经内科住院的缺血性脑血管患者200例作为病例组,选取同期的健康体检者非缺血性脑血管病患120例作为对照组。纳入标准:（1）病例组:病患都严格按照《中华医学会第四届全国脑血管病学术会议》修订的缺血性脑血管病诊断标准进行判断,同时所有患者均需进一步由头颅MRI或头颅CT确诊。患者包括腔隙性脑梗死、动脉粥样硬化性血栓性脑梗死、短暂性脑缺血发作。（2）对照组:同期住院的非缺血性脑血管病例及健康个体。排除标准:（1）病例组:排除低血容量造成的脑梗死,出血性脑梗死,心源性脑栓塞,无症状性脑梗死,周围血管栓塞性疾病,脑出血,血液病、血管畸形或者大动脉炎等引发的脑梗死。（2）所有研究对象都排除恶性肿瘤、甲状腺疾病、重度营养不良、严重肝肾疾病、癫痫、接受器官移植及免疫系统疾病等,同时还排除了近1月内有服用多巴胺类药物、抗癫痫药物、叶酸、避孕药或维生素B12等可能影响血浆Hcy浓度药品的病患。对全体研究入选对象进行清晨空腹抽血,都取3ml肘静脉血,并在试管当中添加2%EDTA-2Na,混合均匀抗凝,-40℃冰箱贮存备用。维生素B6干预试验:将所选取的200例缺血性脑血管病患者随机分为两组,每组100例。两组患者在常规治疗的基础上,其中试验组每天摄入0.51mg维生素B6,而非试验组不予此项干预。所有患者对试验知情。连续干预一周后,取患者血浆,检测Hcy指标。酶联免疫吸附法检测血浆Hcy水平;聚合酶链反应（PCR）方法进行基因片段扩增,扩增片段展开琼脂糖凝胶电泳,依据Marker标准对结果加以断定;RFLP分析基因型的多态性,并对各基因PCR产物进行测序以验证其正确性;免疫分析法分析维生素B6的水平。结果1、病例组和对照组DNA标本CBS C1080T、MS A2756G、MTRR A66G、SHMT C1420T的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡,研究对象具有代表性。2、病例组血浆中Hcy的水平明显高于对照组;全体样本中,CBS 1080TT、MS 2756GG、MTRR 66GG型样本中Hcy水平明显高于野生型样本中Hcy水平,SHMT 1420TT型样本中Hcy水平明显低于野生型样本中Hcy水平。3、病例组和对照组DNA标本中MS A2756G、MTRR A66G、SHMT C1420T的基因型频率分布具有显著性差异,而CBS C1080T的基因型频率分布无显著性差异。其中MS A2756G基因型AA、AG、GG在病例组的频率分布分别为65.5%、22.5%、12.0%,在对照组的频率分布分别为56.4%、22.6%、21%;MTRR A66G基因型AA、AG、GG在病例组的频率分布分别为26.0%、41.5%、32.5%,在对照组的频率分布分别为14.2%、43.8%、42.0%;SHMT C1420T基因型CC、CT、TT在病例组的频率分布分别为33.5%、45.0%、21.5%,在对照组的频率分布分别为41.8%、43.8%、14.4%;CBS C1080T基因型CC、CT、TT在病例组的频率分布分别为41.5%、43.5%、15.0%,在对照组的频率分布分别为39.0%、40.2%、20.8%。4、MS A2756G、MTRR A66G、SHMT C1420T的基因多态性与缺血性脑血管病风险具有显著相关性。其中MS A2756G和MTRR A66G与缺血性脑血管疾病成显著正相关,而SHMT C1420T与缺血性脑血管疾病成显著负相关。CBS C1080T的基因多态性与缺血性脑血管病风险没有显著相关性。5、病例组血浆中维生素B6的水平明显低于对照组,血浆中维生素B6的浓度与Hcy的浓度呈负相关。6、维生素B6干预可明显降低部分基因组缺血性脑血管疾病患者血浆中的Hcy水平。7、CBS C1080T和SHMT C1420T患者中,维生素B6干预时,野生型的研究对象血浆中Hcy的浓度均明显低于非干预组,而突变的患者中维生素B6干预后两组血浆Hcy浓度变化没有显著性差异。MS A2756G和MTRR A66G基因分型的患者中,维生素B6干预后无论是否突变,研究对象血浆中Hcy的浓度均明显低于非试验组。结论1、血浆中Hcy增高和维生素B6的缺乏是缺血性脑血管疾病的重要危险因素。2、MS基因A2756G突变、MTRR基因A66G突变、SHMT基因C1420T突变是血浆Hcy升高的重要影响因素。CBS C1080T不是血浆Hcy升高的影响因素。3、MS基因A2756G突变、MTRR基因A66G突变、SHMT基因C1420T突变与缺血性脑血管疾病密切相关,可作为诊断和治疗的分子靶标。而CBS C1080T突变尚不能认为与缺血性脑血管疾病有关联。4、维生素B6干预对MS A2756G、MTRR A66G各基因型的患者血浆中Hcy水平调节显著,对CBS C1080T、SHMT C1420T野生型基因型的患者血浆中Hcy水平调节显著,而对CBS C1080T、SHMT C1420T突变型基因型的患者血浆中Hcy水平调节不明显。临床可根据患者不同基因型调整干预方案。