白芷化学成分及质量标准研究

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白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch.ex Hoffm.) Ben th. et Hook. F.或杭白芷A.dahurica (Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook. F. var. formosana (Boiss.) Shan et Yuan的干燥根,始载于《神农本草经》,列为中品,性辛温,入肺、胃经,具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓、生肌的作用。本论文在对白芷本草考证、化学成分、质量标准、药理研究及临床应用等综述的基础上,对白芷化学成分进行了分离,通过13C-NMR、1H-NMR和HPLC-MS等方法确证了5个化合物,分别为:欧前胡素(imperatorin)、cnidilin、异欧前胡素(isoimperatorin)、白当归素(byakangelicol)、水合氧化前胡素(oxypeuce- danin hydrate)。对白芷有效部位的提取工艺进行了优选,以总香豆素的提取率为考察指标,对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数各因素以正交试验法进行了研究,确定最佳提取工艺为:95%乙醇12倍量,提取3次,每次2小时,并对最佳工艺进行了验证。以洗脱物中总香豆素含量为指标,对大孔树脂富集纯化白芷有效部位的工艺进行了考察,系统研究了上样浓度、最大吸附量、水洗除杂工艺、洗脱剂乙醇溶液等关键工艺参数,并确定最终工艺为:白芷稠膏等比例用水分散成2g生药·ml-1的混悬液,按药材:湿树脂=4:1的比例上AB-8大孔树脂柱,1ml·min-1动态吸附,先用5倍量的蒸馏水冲柱,再用45%乙醇5倍量洗脱,最后用70%乙醇8倍量洗脱,收集洗脱液,减压回收乙醇,浓缩,70℃减压干燥,即得白芷总香豆素有效部位。以欧前胡素对照品为对照,采用紫外分光光度法,对白芷有效部位总香豆素含量进行了测定,检测波长300nm,并进行了方法学考察,线性方程为:Y=54.65X+0.9837,r=0.99943(n=5),有效部位的浓度在0.00023~0.00789 mg·ml-1之间与吸光度成良好线性关系,加样回收率为100.34%, RSD=0.78% (n=5)。测得有效部位中总香豆素的含量﹥60%,符合有效部位的规定。采用高效液相色谱法对有效部位中欧前胡素、异欧前胡素进行了含量测定,欧前胡素标准曲线为Y=2578+459.3X,r=0.9992(n=5),欧前胡素在0.234~2.34μg范围内质量与峰面积成线性关系,经测定有效部位中欧前胡素的含量为32%,加样回收率为101.21%,RSD =1.87%(n=5)。异欧前胡素标准曲线为Y=5554 +1239.3X,r=0.9994(n=5),表明异欧前胡素在0.65~5.34μg范围内质量与峰面积成线性关系,经测定有效部位中异欧前胡素的含量为6.7%,加样回收率为99.81%,RSD=2.07%。有效部位中欧前胡素和异欧前胡素总的平均含量为38%。采用HPLC法对白芷的香豆素类成分指纹图进行了系统研究,建立了白芷的指纹图谱共有模式,并应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”对各产地药材进行了质量评价,相似度计算结果表明:各类药材与白芷对照药材的相似度在0.34~0.98之间,初步确定了白芷的三个共有指纹峰。以醋酸扭体镇痛试验为白芷药效学模型,分别进行镇痛活性研究,结果表明:FA(水溶性部分)无镇痛活性,与对照组比较无显著性差异,而FB区(脂溶性部分)具有明显的镇痛活性,为白芷药材的药效特征区。经化合物比对,归属了有效部位中4个主要香豆素化合物,初步阐明了白芷有效部位的药效物质基础及谱效学关系。研究了白芷的指纹图谱的勾兑试验,以指纹图谱为指导的全成分勾兑,把福仁堂药店和焦作蓝十字大药房的白芷样品两两勾兑,确定最佳勾兑比例为20%和80%;勾兑后的实际相似度比勾兑前的理论相似度有明显的提高,相似度大于0.91,勾兑取得满意的效果。
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