大黄鱼IFN-γ的分子特征及其功能研究

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干扰素γ(IFN-γ)是I型辅助T细胞(Th1)标志性的细胞因子,在免疫和炎症反应的几乎所有阶段都发挥着重要的作用。研究表明,哺乳类IFN-γ是一种多效能的细胞因子,能增强抗病毒反应、抗肿瘤反应、增强抗原递呈作用、激活并介导炎性反应、促进 Th1免疫反应以及调控细胞增殖和凋亡等功能。目前已经有研究报道克隆出了多个鱼种的IFN-γ基因,且在一些鱼类中还发现了IFN-γ基因的同源物IFN-γrel。目前对鱼类IFN-γ的研究主要集中在其分子及表达特征方面,与哺乳类相比,目前对鱼类I FN-γ的功能认识还不够深入,因此有待于对鱼类IFN-γ功能进行全面且深入的研究。因此,本文展开我国重要海水经济鱼种——大黄鱼IFN-γ(LycIFN-γ)的分子特征及功能研究,将有助于深入了解大黄鱼IFN-γ在免疫反应中的功能,也为其病害防治提供新的思路。  本文克隆了LycIFN-γ基因全长cDNA,长1466 bp,编码由200个氨基酸组成的蛋白。推断的LycIFN-γ蛋白包含鱼类IFN-γ的标识序列V157QSKALWELSGI168,及C末端由4个碱性氨基酸组成的核定位信号序列(RRRR)。组织表达分析显示,LycIFN-γ在各种组织,如脑、肠、头肾、皮肤、鳃、肝脏、脾脏、心脏和血液等中为组成型表达。LycIFN-γ在几种免疫相关细胞,如大黄鱼原代粒细胞、巨噬细胞、头肾白细胞和大黄鱼头肾细胞系(LYCK)中也均有表达。poly(I:C)和三联细菌灭活疫苗刺激后,LycIFN-γ转录水平在大黄鱼脾脏和头肾组织中显著上调。同样在poly(I:C)和LPS刺激条件下,LycIFN-γ转录水平在大黄鱼原代头肾白细胞中也发生明显上调。在大肠杆菌BL21中重组表达的LycIFN-γ融合蛋白(rLycIFN-γ)不仅能够增强大黄鱼巨噬细胞的呼吸爆发反应、上调诱导型一氧化氮合酶基因(iNOS)的转录水平以及一氧化氮(NO)的释放,而且还可上调炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)的转录水平,这表明LycIFN-γ可参与大黄鱼的炎性反应。在rLycIFN-γ处理的大黄鱼头肾白细胞中,IFN-γ受体细胞因子受体B(CRFB13),信号传导及转录激活因子(STAT1),转录因子干扰素调节因子(IRF1)和T-bet(T-box expressed in T cells),Th1相关细胞因子IFN-γ和白细胞介素-2(interluekin-2,IL-2)的转录水平均发生上调,表明LycIFN-γ可能具有促进Th1免疫反应的功能。这些结果提示LycIFN-γ可能具有与哺乳类IFN-γ相似的生物学功能。
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