小麦条锈菌效应蛋白PST14594和PST23981毒性功能的研究

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由条形柄锈菌小麦专化型(Puccinia striiformis f.sp.tritici)引起的小麦条锈病是生产上一种重要的真菌病害,严重影响我国粮食生产和安全。但由于小麦条锈菌毒性变异快,又缺乏稳定的遗传转化体系,使得小麦条锈菌致病基因功能的研究进展迟缓。小麦条锈菌是活体营养型真菌,在入侵寄主小麦的过程中会形成吸器。不仅可以利用吸器与寄主建立联系,汲取营养,还会通过吸器释放效应蛋白,发挥毒性功能。实验室前期在完成小麦条锈菌基因组和吸器转录组测序的基础上,发现了大量的条锈菌分泌蛋白,并通过实验在烟草中筛选到一些抑制由BAX诱导的细胞坏死的效应蛋白。本研究从中挑取其中两个含有核定位信号的效应蛋白PST14594与PST23981,通过对其毒性功能进行研究,揭示其毒性致病机理,为小麦条锈病的病害防治提供一定的理论依据。主要的实验结果如下:(1)生物信息学分析发现,PST14594全长1767 bp,编码588个氨基酸,无保守结构域,无跨膜结构,含有NLs,有信号肽。非锈菌特异基因,在条锈菌不同小种间呈现较低的多态性。PST23981全长894 bp,编码297个氨基酸,有叶绿体转运肽,无跨膜结构,含有NLs,有信号肽。为锈菌特异基因且保守存在,和PST14594相比,该基因在条锈菌不同小种间多态性相对较高。(2)PST14594和PST23981全长和去信号肽序列均可以抑制BAX诱导的细胞坏死,均在小麦条锈菌入侵寄主小麦的过程中高度诱导表达。沉默PST14594后,条锈菌的生长发育受到抑制、侵染能力下降。(3)筛选得到PST14594的一个候选靶标为半胱氨酸蛋白酶1(TaCP);筛选得到PST23981两个候选靶标,一个是条锈菌的假想蛋白(PST11069),另一个是寄主植物的BAX抑制子相关蛋白(TaTBI)。(4)PST14594全长和去信号肽序列均定位在整个细胞内。PST23981全长定位在叶绿体内,去信号肽的成熟蛋白定位在细胞核内。PST14594的候选靶标TaCP和PST23981的候选靶标TaTBI均定位在整个细胞内。
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