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多发性内分泌腺瘤病2型(Multiple Endocrine Neoplasia Type 2,MEN2)是一种常染色体显性遗传病,发生率约为1/30000,按照临床表现将MEN2分为MEN2A、MEN2B和家族性甲状腺髓样癌(Familiar Medullary Thyroid Carcinoma,FMTC)。MEN2A特征为主要发生甲状腺髓样癌(Medullary Thyroid Carcinoma,MTC),约50%伴发肾上腺嗜铬细胞瘤(Pheochromocytoma),20-30%伴发甲状旁腺腺瘤(Primary Hyperparathyroid Adenoma,PHPT);MEN2B除发生MTC、PCC外还可伴有神经粘膜瘤(Ganglioneuromatosis)、骨骼发育异常等,但是不发生甲状旁腺腺瘤;FMTC则为家族中仅发生MTC而无其他肿瘤的发生。RET原癌基因突变被认为是MEN2的致病基因,RET基因型和MEN2临床表型之间存在一定的相关关系。目前尚缺乏针对MEN2的大规模中国人群研究以及除RET基因突变之外其他导致MEN2发生发展的分子机制研究。本研究首先总结分析了上海市内分泌代谢病临床医学中心自2002年1月至2013年3月间收集的来自全国的53个独立的MEN2家系,其中MEN2A先证者共45例,MEN2B先证者共8例,对先证者及其家系成员共372人进行相关临床及遗传资料进行采集,提取外周血DNA对RET基因热点突变位点(第8、10、11、13、14、15、16外显子)设计引物pcr直接测序,分析中国人群ret基因型和men2临床表型的特点及相关关系。结果共检测出携带外周ret基因突变者135例,其中men2a为125例,men2b为10例。men2先证者中ret基因突变类型11种,其中10种为men2a突变,分别为p.c634r(n=19,42.22%),p.c634y(n=12,26.67%),p.c634w(n=4,8.89%),p.c634s(n=3,6.67%),p.c634f(n=2,4.44%),p.c620r(n=1,2.22%),p.c620s(n=1,2.22%),p.c611y(n=1,2.22%),p.c618r(n=1,2.22%),p.e768d(n=1,2.22%);men2b均为p.m918t(n=8,100%)。其中p.c620r,p.c620s,p.c611y和p.e768d四种基因型为首次在men2中国人群中报道。比较携带ret基因第10号和11号外显子突变患者的临床表现,发现10号外显子突变患者均不伴有甲状旁腺肿瘤,mtc的发生晚于11号外显子突变的患者(p<0.05),推测可能是由于11号外显子突变更为接近跨膜区,增加了发病风险。而对于634位点的5种不同突变类型,携带者首次pcc手术年龄存在统计学差异(p<0.05),推测可能是不同突变类型影响ret蛋白的空间结构从而导致不同激酶活性。men2相关的mtc患者发病年龄明显早于散发mtc患者(36.27±14.34vs45.34±13.57,p<0.01),淋巴结转移率高于后者(62.50%vs39.29%,p<0.05)。在阐明已知ret基因型和men2相关关系的基础上,本研究进一步利用affymetrixsnp6.0芯片和外显子组测序技术,在基因组范围寻找除ret基因突变之外与men2发病相关的分子机制。第一阶段的分析包括4例MEN2A患者配对的肿瘤组分及外周血DNA。结果发现MEN2肿瘤组分平均突变数目显著少于非内分泌肿瘤(7.58 vs 65.60,P<0.01);4例MEN2A患者的9个肿瘤组织中共发现32个体细胞突变,其中28个突变为点突变,4个突变为小片段插入/缺失;发现13个不同的基因同时存在体细胞突变或拷贝数变异。通过SIFT/POLYPHEN2进行蛋白功能预测后选取9个基因(BEX5,BHLHB9,EIF4G1,GRAP,KRT38,MLL,OR3A1,TROVE2,ZDHHC8)在独立样本的MTC(N=20)和PCC(N=20)组织中进行PCR直接测序验证,未发现重复基因突变。进一步将突变型和野生型EIF4G1,GRAP质粒分别转染甲状腺髓样癌细胞株──TT细胞,结果显示突变型EIF4G1增加TT细胞增殖和RET/MAPK磷酸化水平。提示RET基因突变是MEN2的主要启动因素,然而一些低频突变例如EIF4G1可通过调控RET通路的活性而参与MEN2A肿瘤的发生和发展。