【摘 要】
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随着分子生物学的飞速发展和人类基因组计划的完成,对基因结构和功能研究的不断深入,许多与猪的生长和肉质性状相关的QTL和基因被发现.肉质性状是个综合性状,中外猪种在肌肉
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随着分子生物学的飞速发展和人类基因组计划的完成,对基因结构和功能研究的不断深入,许多与猪的生长和肉质性状相关的QTL和基因被发现.肉质性状是个综合性状,中外猪种在肌肉生长和肉品品质方面表现出很大差异.为探讨造成这种表型差异的遗传基础,寻找与猪生长和肉质性状相关的基因,该研究利用mRNA差异显示技术对广东省地方品种蓝塘猪和引进品种大白猪达到经济成熟时的眼肌组织mRNA进行比较分析,并结合Real-time荧光定量PCR进行表达量的分析.主要结果如下:①利用200对引物组合(10种锚定引物和20种随机引物),检测了蓝塘猪和大白猪眼肌组织近10000多条的cDNA片段,分离得到了两个品种中存在差异表达的5条ESTs(ESTsp<,7>、ESTsp<,8>、ESTsp<,9>、ESTsp<,10>、ESTsp<,11>),其中ESTsp<,7>在大白猪的表达量比蓝塘猪的高,其它4条的表达量为蓝塘猪比大白猪高.②表达差异片段的测序结果显示5条EST片段的长度范围在137bp~519bp之间,平均大小为227bp.③用BLAST软件对得到的序列与GenBank中的序列进行同源性比对,发现在5个ESTs中,只有ESTsp<,7>与已知的线粒体基因组编码的细胞色素氧化酶亚单位Ⅲ基因高度同源,其余4条EST与已知序列均无同源性.④SYBR GreenI实时荧光定量PCR结果表明ESTsp<,3>与ESTsp<,5>在两个品种中存在表达量的差异.⑤探讨SYBR Green荧光染料结合普通PCR试剂进行定量PCR的可行性,得到了可靠的定量分析结果.⑥考虑到SYBR Green敏感性的问题,利用4倍法系列稀释标准样品,四点绘制标准曲线,标准曲线的拟合度好,R<2>达到了0.9992以上.
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