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目的:本论文利用肥大细胞及巨噬细胞研究了栎瘿酸(roburic acid)的抗炎作用及分子机制,为将此类化合物开发成抗炎新药提供初步实验依据和理论基础。方法:1.利用MTT比色法(MTT assay)测定栎瘿酸对骨髓来源肥大细胞(bone marrow-derived mast cell,BMMC)、人肥大细胞(human mast cell,HMC-1)、RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,mouse leukaemic monocyte macroph)不产生细胞毒性的浓度范围。2.利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测栎瘿酸在Ig E/Ag激活的BMMC内对组胺(histamine)释放、白三烯C4(leukotriene C4,LTC4)合成、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)生成的影响;检测栎瘿酸对LPS诱导的RAW264.7内IL-6生成的影响。利用免疫荧光的方法检测栎瘿酸对激活的BMMC内钙离子动员的影响。3.利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7建立炎症反应模型,利用Griess试剂法检测栎瘿酸对一氧化氮(nitric oxide,NO)生成的影响。4.利用Western blot方法研究栎瘿酸对经Ig E/Ag作用的BMMC、以及经过PMA和A23187作用的HMC-1内各种信号通路蛋白包括p38、c-Jun氨基端激酶(c-jun n-terminal kinase,JNK)、胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-reg-ulated kinase,ERK1/2)、蛋白激酶B(Akt,protein kinase B)、核转录因子抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor kappa-B,IκB)、核转录因子(nuclear factor of kappa B,NF-κB)、细胞内磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,c PLA2)等的影响;并考察了栎瘿酸对经LPS作用的RAW264.7内信号蛋白p38、JNK、ERK、IκB、NF-κB等的影响。5.利用小鼠被动皮肤过敏反应(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)研究了栎瘿酸对Ig E/Ag处理的小鼠耳朵内皮染色深浅及肿胀程度的影响,并利用组织切片、甲苯胺蓝染色实验观察PCA反应小鼠致敏耳朵组织内的肥大细胞数目。结果:1.栎瘿酸抑制Ig E/Ag激活的BMMC内组胺的释放、LTC4的合成、IL-6的生成;其抑制作用是通过抑制钙离子动员,MAPKs的激活而抑制c PLA2的磷酸化,且抑制Akt/IκB/NF-κB通路的激活而实现的。另外,栎瘿酸抑制PMA和A23187诱导的HMC-1的激活,该作用是通过降低MAPKs通路的激活而抑制c PLA2的磷酸化及抑制Akt/IκB/NF-κB通路的激活而实现的,此结果与对BMMC的作用一致。此外,栎瘿酸使Ig E/Ag诱导的PCA试验小鼠耳廓内皮染色蓝斑的范围变小、颜色变浅并耳朵的肿胀程度减轻,提示栎瘿酸具有良好的体内抗炎作用。2.栎瘿酸显著抑制LPS诱导的RAW264.7内NO和IL-6的生成、i NOS的合成;下调NF-?B抑制蛋白激酶α/β(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,IKKα/β)的磷酸化水平,抑制I?B磷酸化及降解,继而抑制NF-?B p65的核转移。同时,栎瘿酸对MAPKs中p38和JNK的磷酸化具有抑制作用,但对ERK1/2的磷酸化未显示出明显的抑制作用。结论:在BMMC中,栎瘿酸抑制Ig E/Ag激活BMMC内的组胺释放、钙离子动员、LTC4合成、IL-6生成,其机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活及降低p38MAPKs的磷酸化有关。另外,栎瘿酸抑制PMA及A23187激活的HMC-1内NF-κB通路的激活,且抑制p38 MAPKs的磷酸化,上述结果与在BMMC内结果是一致的。在RAW264.7中,栎瘿酸抑制LPS诱导的NO及IL-6的生成,该作用可能与抑制NF-?B及MAPKs信号通路有关。PCA反应证明栎瘿酸具有较好的体内抗炎活性,提示栎瘿酸在预防和治疗炎症相关疾病具有潜在的应用价值,有望成为防治炎症的候选化合物。本课题组首次系统的报道栎瘿酸的抗炎作用及机理。