绿鳍马面鲀繁殖生理及性激素合成关键酶的分子表达机制

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本论文以烟台百佳水产公司人工养殖的绿鳍马面鲀为研究对象,对其进行为期一年的采样,运用组织学方法对性腺周年发育情况进行鉴别,运用分子生物学技术对三种类固醇合成酶相关基因进行了克隆以及周期表达检测,同时运用激素放射免疫测定方法对血清类固醇水平进行测定,并将以上因素进行综合分析,得出结果与结论如下:1绿鳍马面鲀性腺发育周年变化的组织学研究对绿鳍马面鲀进行隔月采样,周期为一周年,对性腺组织学和采样数据进行整理分析。绿鳍马面鲀为非同步分批产卵型鱼类,产卵期在4月下旬到5月下旬,卵巢内的卵母细胞发育不同步,切片可见多个时相卵母细胞,精巢为小叶型,有贮精囊,贮精囊也随生殖周期发生结构变化。卵巢与精巢发育均经历6个时期,卵巢Ⅰ期与精巢Ⅰ期Ⅱ期只出现一次,性腺首次发育成熟,繁殖过后经历恢复期,进入重复发育期,卵巢从Ⅱ期开始,精巢从Ⅲ开始。2绿鳍马面鲀血清类固醇激素水平周年变化采用125I标记的放射免疫测定方法检测雄鱼和雌鱼的睾酮(T)和雌二醇(E2)的变化水平。研究发现:雌性绿鳍马面鲀血清中E2含量最高值出现在卵黄合成前期,血清中雌二醇水平的提高,满足了卵黄形成和积累的需要,促进了卵巢的成熟。排卵前E2含量下降,此时E2诱导肝脏合成大量卵黄蛋白原,变化趋势与雌性HSI变化一致。随着卵黄累积,E2含量与HSI同时下降。雌性绿鳍马面鲀血清中T在排卵期达到最高,与雌性GSI变化一致。雄性绿鳍马面鲀血清中E2在整个繁殖周期内无显著差异,且低于雌鱼体内E2水平,常年维持在较低水平;雄性绿鳍马面鲀血清中T含量变化呈明显周期性变化,变化趋势与雄鱼GSI一致,T在绿鳍马面鲀繁殖期的高水平表达,与精子发育和成熟密切相关。3绿鳍马面鲀芳香化酶基因的克隆与时空表达使用RACE克隆得到了绿鳍马面鲀CYP19A的全长序列1746bp,编码507个氨基酸,克隆得到CYP19B的核心序列1244bp,编码414个氨基酸。两条基因都含有芳香化酶保守序列以及各自的特异性保守区,系统进化分析发现两条基因分别与硬骨鱼类CYP19A和CYP19B基因同属于一个分支。分别进行了两条基因的空间表达研究,发现CYP19A只在卵巢中有表达,而CYP19B脑、鳃和卵巢中有表达,在脑和性腺中进行了周期表达研究,两条基因相对表达量的变化趋势均与繁殖周期紧密相关。4绿鳍马面鲀CYP17-Ⅰ基因的克隆与时空表达使用RACE克隆得到了绿鳍马面鲀CYP17-Ⅰ的全长序列1580bp,编码511个氨基酸。对CYP17-Ⅰ的基因结构进行分析,发现含有CYP17-Ⅰ的保守序列,与其他物种的CYP17-Ⅰ基因进行比对,构建了绿鳍马面鲀CYP17-Ⅰ基因的系统进化树,与红鳍东方鲀CYP17基因汇为一个分支,二者进化地位较为接近。对CYP17-Ⅰ进行了的空间表达研究,在脑、胃、卵巢、精巢中检测到表达量较高,在心、脾、肾中也检测到一定量的表达,在垂体和鳃中检测到了微弱表达,其他组织未检测到表达。在性腺中进行了周期表达研究,无论在精巢还是卵巢中CYP17-Ⅰ表达量的最高峰均出现在繁殖季节排卵前期。
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