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目的 周围神经损伤(Peripheral Nervous Trauma,PNT)是骨伤科临床常见的严重疾患,主要是由交通事故、房屋倒塌、重物打击致肢体受到严重的嵌压、牵拉、扭转、撕裂或高速弹片、骨折脱位、产伤、麻醉、昏迷、昏睡时致伤等多种原因引起,导致周围神经发生不同程度的损伤。PNT后出现神经出血、水肿、坏死、囊腔形成、退变胶质化等一系列病理变化,以至神经元丧失、轴突脱髓鞘,临床表现为受损肢体远端的运动、感觉及反射的障碍。而Schwann细胞位于周围神经系统内,是一种能改变神经损伤后的微环境,防止继发性损伤,并可形成再生轴突的引导通道,分泌大量神经营养因子,促进和诱导神经组织有效修复再生,促进肢体功能恢复。本实验选用的“腰痛定注射液”由多味行气活血的中药组方,用其制成的中药“腰痛定注射液”药物血清对大鼠周围神经Schwann细胞进行体外培养,通过观察加药后细胞增殖的情况,选择合适的药物浓度,为研究中药治疗周围神经损伤的机理提供可靠的实验依据。 方法 在细胞鉴定实验中,取SD雄性大白鼠坐骨神经,用胰酶及胶原蛋白酶Ⅰ消化后接种到培养瓶中,取经传代培养的Schwann细胞,用PAP方法对Schwann细胞进行S-100蛋白抗体免疫组织化学法染色鉴定,并以同样方法检测大鼠成纤维细胞作比 在PH值测定实验中,用PH测定仪测定不同浓度的中药“腰痛定注射液”药物血清的PH值,同时检测含10%小牛血清的DMEM细胞培养液作比较。 在细胞增殖实验中,取传代培养的Schwann细胞,稀释消化后接种到培养板上,并随机分为实验组和对照组,在实验各组中分别加入不同浓度的中药“腰痛定注射液”药物血清,于加药当天及加药后培养第3、5、7、9和11天进行MTT测试,并记录MTT法分析后的实验结果。 实验数据经计算机SPSS和excel软件按多因素方差分析法和T-test进行统计学处理,P<0.05为显著性差异,检测统计处理的结果用均数±标准差((?)±S)表示。 结果 在细胞鉴定实验中,倒置显微镜下观察到Schwann细胞的细胞浆呈棕黄色,而成纤维细胞呈蓝色。 在PH值测定实验中,PH测定仪显示中药“腰痛定注射液”制剂PH=8.25,含10%小牛血清DMEM培养液PH=7.40,经培养液稀释后的中药“腰痛定注射液”PH值均降低。其中高浓度组25mg/ml和12.5mg/ml中药“腰痛定注射液”药物血清的PH值为8.10和7.80;中浓度组6.25mg/ml中药“腰痛定注射液”药物血清的PH值为7.70;低浓度组3.125mg/ml和1.5625mg/ml中药“腰痛定注射