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通过苜蓿花药或花粉培养获得单倍体,进一步利用纯系材料杂交育种,可充分发挥杂种优势,缩短育种年限并提高育种效率。本研究以花药为材料对草原1号杂花苜蓿、呼伦贝尔黄花苜蓿和新疆大叶紫花苜蓿进行花粉组织培养,通过固体与液体悬浮培养基、不同激素配比进行正交试验诱导花药愈伤组织,分化和生根培养后获得再生植株,建立适宜的花药组培再生体系;再生植株经气孔数初选、根尖染色体和流式细胞仪鉴定,确定染色体倍性。主要研究结果如下:(1)花药愈伤组织的诱导,草原1号杂花苜蓿固体培养基优于液体悬浮培养基,而呼伦贝尔黄花苜蓿与新疆大叶紫花苜蓿液体悬浮培养基优于固体培养基,出愈率最高值分别为83.33%、70.00%、83.33%。根据正交试验出愈率极差的分析,草原1号杂花苜蓿适宜的固体培养基为B5 +0.4 mg/L NAA+ 0.75 mg/L 2,4-D + 1.0 mg/L KT + 0.75 mg/L 6-BA;呼伦贝尔黄花苜蓿适宜的液体悬浮培养基为B5 + 0.4 mg/LNAA + 0.50 mg/L 2,4-D +3.0 mg/L KT +0.25 mg/L 6-BA;新疆大叶紫花苜蓿适宜的液体悬浮培养基为 MS + 0.2 mg/L NAA+ 2.0 mg/L 2,4-D + 3.0 mg/LKT+ 0.5mg/L 6-BA。(2)影响3种苜蓿花药愈伤组织形成的主要激素种类不同。在固体培养过程中花药愈伤形成主要因素,草原1号杂花苜蓿为KT、呼伦贝尔黄花苜蓿及新疆大叶紫花苜蓿为2,4-D;在液体悬浮培养过程中花药愈伤形成主要因素,草原1号杂花苜蓿雄性不育株为KT、雄性可育植株为6-BA、呼伦贝尔黄花苜蓿及新疆大叶紫花苜蓿为2,4-D。(3)3种苜蓿花药愈伤分化培养的适宜培养基为MS + 1.0 mg/L KT +0.2 mg/L NAA,分化率 58.33%-73.33%。(4)草原1号杂花苜蓿雄性不育植株、呼伦贝尔黄花苜蓿及新疆大叶紫花苜蓿花药培育再生植株中单倍体植株分别为4株、1株、7株,分别占各自总株数的8.51%、20%、14%。