凡纳滨对虾血蓝蛋白蛋白质翻译后修饰水平多样性的研究

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我国是世界上最大的对虾养殖生产国,但近年来传染性疾病特别是病毒性病和细菌性病给对虾养殖业造成了巨大损失,故深入研究对虾自身免疫抗病机制,对实现对虾健康养殖的目的具有重要意义。有趣的是,近年来发现存在于对虾血淋巴中的输氧蛋白——血蓝蛋白(hemocyanin, HMC)还具有抗病毒、抑菌等多种免疫学功能,尤其是最近课题组发现其功能多样性的分子机制可能与其分子多态性有关,但其在蛋白质翻译后修饰水平是否存在多态性的研究尚不深入。为此,本研究以凡纳滨对虾血蓝蛋白为研究对象,在课题组已有研究的基础之上,对其糖基化、磷酸化修饰进行了较为深入的探讨,所获研究结果如下:  1、对虾血蓝蛋白糖基修饰多样性分析  首先,采用不同层析技术组合获得5种不同的HMC成分,即S-HMC(分子筛层析)、A-HMCs和A-HMCl(亲和层析)、AL-HMCs和AL-HMCl(亲和层析-ConA凝集素柱层析串联)。2-DE分析显示,该5种HMC在2-D图谱上分别表现为9、6、6、7、6个等电点和分子量大小存在差异的蛋白质点。在此基础之上,进一步选用4种凝集素(ConA, PNA,UEA和DBA)对其进行2-D凝集素印迹分析。结果发现,不同HMC对4种凝集素的识别存在较大差异。如,S-HMC9个蛋白点中仅有5个蛋白点可与ConA发生特异性结合,但全部蛋白质点均可识别其它3种凝集素;A-HMCs6个蛋白点均可与ConA和PNA相结合,但仅有4、3个点与UEA和DBA反应呈阳性;AL-HMCl6个蛋白点均可被 ConA和UEA所识别,但仅有2、4个点与PNA和DBA特异性显色。  继而,通过玻片凝集技术对该5种HMC的免疫学功能进行对比分析。结果显示,不同 HMC对不同病原菌的凝集活性存在较大差异,其凝集活性大小顺序大致为S-HMC
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