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脑缺血预处理（cerebral ischemic preconditioning，CIP）诱导的脑缺血耐受（brain ischemic tolerance，BIT）的产生涉及神经介质、受体及基因的表达等一系列过程。在BIT的诱导过程中，细胞在信号启动与转导，基因复制与转录，蛋白合成与修饰等环节发生相应的变化。在信号的启动环节，腺苷机制受到众多学者的重视。我室新近研究表明，BIT诱导过程中，腺苷受体的数量及亲和力均增加，进一步丰富了BIT诱导的腺苷机制的研究。但腺苷受体激动剂作为预处理对神经元所产生的保护作用较CIP所诱导的保护作用弱，说明还有其它机制参与这一过程。近年来，一氧化氮（NO）在缺血缺氧耐受诱导中的作用引起了人们的兴趣。离体研究表明，NO在神经元缺血缺氧预处理保护机制中发挥重要作用。如在离体大鼠海马脑片的研究发现，缺氧预处理可显著减少其后严重缺氧所引起的诱发电位波幅的下降，而一氧化氮合酶（NOS）阻断剂7-硝基吲哚（7-NI）可阻断CIP的这种作用，提示原生型NOS（cNOS）产生的NO参与了缺氧预处理对神经元的保护作用。近来有人应用培养神经细胞氧-葡萄糖剥夺（OGD）耐受模型，系统地研究了NO在神经元OGD耐受诱导中的作用，发现给与NOS抑制剂可阻断OGD耐受的诱导，给NO供体可替代OGD诱导耐受，表明NO的产生既是神经元OGD耐受形成的必要条件，又是充分条件。这些研究结果为研究整体状态下NO在BIT诱导中的作用提供了线索。 在新生鼠缺氧预处理模型中，应用非特异性NOS抑制剂L-NNA完全阻断了缺氧预处理对神经元的保护作用，而对神经元型NOS（nNOS）及诱生型NOS（iNOS）阻断剂7-NI和氨基胍则无效，提示<WP=5>由内皮型NOS（eNOS）产生的NO介导了保护作用。有学者对单纯全脑缺血3 min和6 min 以及6 min缺血前1天给予3 min CIP三组大鼠海马CA1区锥体细胞NADPH-黄递酶活性的表达情况进行比较，发现三种情况下NADPH-黄递酶表达的变化基本一致，即在损伤和未损伤的大鼠海马组织中均可见NADPH-黄递酶活性表达的增高，并且增高的时相也一致，说明NO的存在不一定与损伤相关联，但NO的升高是否参与整体状态下BIT的诱导，尚需进一步确定。本研究利用大鼠全脑BIT模型，观察BIT诱导过程中，NOS活性、NO生成以及NOS抑制剂L-NAME对BIT诱导的影响，在整体水平探讨NO在BIT诱导中的作用，并对NO参与BIT诱导的信号转导机制做了初步探讨。1. 全脑缺血耐受模型中缺血时间及性别对CIP保护效应的影响本实验通过观察CIP持续时间、CIP与后续损伤性缺血间隔时间、损伤性缺血持续时间及性别对CIP保护效应的影响，选择能使CIP发挥最大保护效应的时间参数建立理想的BIT模型。采用四血管闭塞法（4-vessel occlusion，4VO），制作大鼠全脑缺血耐受模型。永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠108只，按动物性别分为两组进行实验。 1. 雄性大鼠组，分为4组：①Sham组（n=6）；只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流；②缺血3 min组（n=6）：挟闭双颈总动脉3 min；③损伤性缺血组（n=18）：根据阻断血流时间的不同，进一步分为6 min、10 min和15 min组（每组n=6），分别挟闭双颈总动脉6 min、10 min和15 min；④CIP＋损伤性缺血组（n=24）：根据CIP与损伤性缺血时间间隔以及损伤性缺血时间的不同，分为4个亚组，每组n=6，分别为3min-3d-6min（挟闭双颈总动脉3 min作为CIP，再灌注3 d后再挾闭6 min，下同）、3min-3d-10min、3min-3d-15min和3min-1d-10min组。<WP=6>2. 雌性大鼠组，分为5组：①Sham组（n=6）；只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流；②缺血2.5 min组（n=6）：挟闭双颈总动脉2.5 min；③缺血3 min组（n=6）：挟闭双颈总动脉3 min；④（n=12）：根据阻断血流时间的不同进一步分为6 min、10 min组（每组n=6），分别挟闭双颈总动脉6 min、10 min；⑤CIP＋损伤性缺血组（n=24）：根据预缺血及损伤性缺血时间的不同，进一步分为4组（每组n=6），分别为2.5min-3d-6min（挟闭双颈总动脉2.5 min作为CIP，再灌注3 d后再挾闭6 min，下同）、3min-3d-6min、2.5min-3d-10min和3min-3d-10min组。椎动脉凝闭术后2天，在乙醚麻醉下分离双侧颈总动脉，待动物清醒后进行挟闭，阻断血流。挾闭双侧颈总动脉期间，可观察到大鼠瞳孔散大，脑电波频率变慢，波幅逐渐缩小甚至呈等电位线，翻正反射消失，证明产生脑缺血。所有大鼠在术后或末次缺血再灌后饲养7天，断头取脑，硫堇染色，在光学显微镜下观察海马组织形态并对其组织学改变进行分级（0级：无神经元死亡；1级：散在的神经元死亡；2级：成片的神经元死亡；3级：几乎全部的神经元死亡），取双侧平均等级作为统计值。高倍镜下计数海马CA1区每1mm区段内细胞膜完整、胞核饱满、核仁清晰的锥体细胞数目，每张切片双侧海马各计数7个区段取平均数为神经元密度（neuronal density, ND）。计算以下参数对CIP的保护效应作定量分析：①保护数（protection number，PN）：CIP+损伤性缺血组与损伤性缺血组的ND值之差；②保护指数（protection index，PI）：保护数与sham组ND值之比；③增长指数（growth index，GI）：保护数与损伤性缺血组ND值之比。结果显示，雄性大鼠中， Sham组?