论文部分内容阅读
背景和目的:恶性肿瘤的侵袭和转移是导致治疗失败的关键因素。IL-6作为重要的促炎因子,参与了肿瘤发生发展的全过程,是肿瘤相关炎症的关键分子。我们之前的研究发现,IL-6可以在肺癌中激活ATM-NF-κB通路、促进MMPs的表达及活性,并可以介导肿瘤细胞的侵袭和迁移。肿瘤转移涉及肿瘤微环境各组分的相互作用,包括肿瘤细胞自身发生了形态、极性、能动性改变,即上皮间质转换(EMT)的发生。EMT赋予细胞迁移和侵袭以及诱导为干细胞的性质,阻止了细胞的衰老和凋亡,并促成了免疫抑制微环境的形成。间质状态与肿瘤迁移到远处器官并维持“干性”密切相关,给它们在侵袭起始时继发分化为多种细胞类型提供了可能。但到目前为止,炎症因子IL-6是否诱导肺癌细胞发生EMT能力的影响及通过何种途径诱导EMT转变尚不清楚。 方法:首先以Real-time PCR、ELISA技术检测NCI-H446、A549、LTEP-a-2等几种肺癌细胞系的IL-6表达水平,及以Transwell检测其相应的迁移能力;其次,进行细胞爬片法,以光学显微镜和激光共聚焦显微镜观察肺癌细胞在IL-6的刺激下的细胞形态的变化情况和EMT相关指标的变化情况;再对IL-6表达高低不同的几种肺癌细胞系,分别给予外源性IL-6刺激或以siRNA沉默技术抑制IL-6表达,以Real-time PCR观察EMT相关指标的变化情况;再以ATM抑制剂、siRNA沉默技术抑制相应通路激酶的活性后,以Real-time PCR和激光共聚焦显微镜观察相应激酶在IL-6促肺癌EMT的作用;将NCI-H446、A549细胞进行siRNA沉默ATM后经尾静脉注射到小鼠体内,再给予IL-6刺激,观察肺组织和肝组织成瘤情况,以免疫组化技术检测ATM的磷酸化水平以及EMT指标;最后对来自临床的有或无肺癌远处转移的73例标本进行免疫组化检测ATM磷酸化和EMT指标变化情况,验证细胞学水平和动物实验得到的规律。 结果:(1)IL-6在肺癌中可明显促进肿瘤细胞EMT的发生;(2)在动物实验中发现,静脉注射IL-6可促使ATM磷酸化;(3)用ATM激酶抑制剂CGK-733或siRNA基因沉默技术阻遏ATM活性可使IL-6所诱导的EMT各项指标明显得到抑制,并相应抑制肿瘤转移的发生;(4)在动物实验中,IL-6可以促进肿瘤迁移及EMT的发生,ATM激酶抑制剂CGK-733或siRNA基因沉默技术抑制ATM活性可阻遏这种趋势;(5)在发生肺癌远处转移的患者的标本中IL-6高表达,ATM明显激活,且与EMT指标变化趋势相一致。我们对73例人的肿瘤标本进行研究,通过免疫组化的检测技术,发现ATM在47例肿瘤中都被激活,且磷酸化的ATM在有远处转移的肿瘤中相对高表达。证明ATM在调控肿瘤转移中发挥重要作用。提示IL-6通过激活ATM-NF-κB通路促进EMT的发生,增强肿瘤迁移。 结论:本课题以siRNA干扰或激酶抑制剂的使用研究ATM-NF-κB通路在促炎因子IL-6促肺癌细胞发生EMT转变中的研究,明确了ATM-NF-κB通路在IL-6促肺癌转移中的关键角色,并在动物实验和临床标本中证实了这一点,为预防肺癌化疗后肿瘤转移提供了潜在的治疗靶点。