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目的:代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)是一种与肝脂肪过量,脂质变性相关的肝脏疾病。在临床上,MAFLD的病症主要从单纯性脂肪肝(NAFL)发展成非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化甚至是肝癌。随着人们物质生活质量地不断提高,人的饮食习惯和生活结构发生了改变,肥胖的人数增加,导致MAFLD的发病率不断升高。然而,目前已上市的药物中并没有单一针对MAFLD。同时,因为氧化应激是MAFLD的发病机制中关键因素,所以寻找出对肝脏具有保护作用的抗氧化剂,有望成为新的治疗MAFLD的方案之一。多肽普遍存在与各种生物体内,具有许多生物活性,其中包括抗氧化活性。活性多肽由于其毒性小、易被吸收的特征,引起许多药物开发人员的关注。我们通过前期筛选出具有抗氧化活性的多肽,从而探究活性多肽对氧化损伤肝脏的保护作用以及相关的作用机制。方法:本研究以AAPH诱导氧化损伤L02细胞模型和CCL4诱导小鼠急性肝损伤模型为研究对象,分别在体外水平和体内水平去评价活性多肽的作用以及机制。在体外实验上,我们通过MTT检测法筛选具有抗氧化活性的多肽,然后通过流式细胞术检测多肽对氧化损伤L02细胞的ROS水平、线粒体膜电位、细胞凋亡和细胞周期阻滞的影响,并且检测了相关的氧化指标(SOD、MDA)和ATP的水平。在体内实验上,我们将小鼠分为正常对照组、CCl4造模组和多肽给药组,将剂量为50 mg/kg的多肽a以腹腔注射形式给药,每天一次,共给药一周,末次给药1h后,用0.2%CCL4进行造模。随后,我们检测了各组小鼠血清的ALT、AST、ALB、ALP、TC和TG水平,以及炎症因子IL-1β、IL-6的水平。接着,我们去各组小鼠的肝脏右小叶进行石蜡包埋,并通过HE染色,观察肝脏的病理变化。最后,运用Western Blotting检测小鼠肝脏组织的中氧化应激、线粒体凋亡通路、线粒体自噬相关蛋白的表达。结果:MTT的结果显示,多肽a能增加AAPH诱导氧化损伤的L02细胞的存活率。与AAPH造模组相比,多肽a能减少细胞内MDA的水平以及提高SOD的活性和ATP的水平。在流式细胞术检测结果显示,与AAPH造模组相比,多肽a能降低细胞内ROS的水平,是细胞线粒体膜电位上升,从而减少细胞凋亡,此外还能降低S期周期阻滞的比例。在动物实验结果中显示,与CCl4造模组相比,多肽a能明显减少血清中ALT、AST的水平和明显改善了肝脏病理的变化,而且能减少血清中IL-β1,IL-6的水平。Western Blotting的结果显示,与CCL4造模组相比,预防性给与多肽a的小鼠肝组织中Nrf2通路相关蛋白Nrf2和NQO1表达增加,线粒体凋亡通路相关蛋白p53、Bax、细胞色素C(cyto-c)、Caspase3和Cleaved PARP表达降低,Bcl-2表达增加,线粒体自噬相关蛋白AMPKα、PINK1、Parkin、HSP60和COX IV表达增加,同时炎症相关因子NF-κB表达增加。结论:总的来说,多肽a在氧化损伤的肝细胞以及肝脏组织中,都表现出具有抗氧化的活性。多肽a通过Nrf2通路调节抗氧化酶的活性,降低细胞中ROS的水平,减少了氧化损伤诱导的p53介导的线粒体依赖性通路凋亡,而且诱导了肝细胞中受损线粒体介导AMPKα-PINK1/Parkin通路进行自噬以及减少炎症反应,从而起到了保护肝脏免受氧化损伤的作用。这些结果为抗氧化多肽作为MAFLD的候选药提供了更多的实验证据以及可能性。