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目的:目前治疗阿尔茨海默病的药物主要有:胆碱脂酶抑制剂、N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体拮抗剂、促智药、抗氧化剂等药物治疗,但目前尚无针对其病因治疗的药物;我国中医药资源丰富,中药治疗具有多途径多靶点等特点,为明确补肾益气药物对阿尔茨海默病(AD)的疗效和安全性。本研究运用Cochrane系统评价补肾益气方药治疗阿尔茨海默病(AD)的疗效和安全性,为实验研究和临床运用提供了基础。于顾然教授自拟“补肾益精方”治疗阿尔茨海默病的临床研究提示效果确切,进一步基础试验均有良性结果,本研究提供研究黄芪的主要成分环黄芪醇对Aβ介导的体外血脑屏障模型的反应,研究补肾益精方治疗AD的机制。方法:1.评价补肾益气方药治疗阿尔茨海默病的疗效和安全性:本实验系统检索近9年PubMed、中国生物医学数据库(CBM web)、中国知网(CNKI)、维普数据库(VIP)、万方数据库(WanFang Data)的相关文献。仔细阅读文献题目、摘要、全文进行筛查,按照纳入和排除相关标准选择所有文献病选择所有符合纳入标准的文献并提取有效数据,对结果进行统计分析采用Review Manager 5.3软件对结果进行统计分析。2.探讨环黄芪醇对Aβ介导的体外血脑屏障模型损伤的保护及可能机制:①MTT法研究寡聚体Aβ1-42诱导bEnd.3细胞凋亡的最适浓度,以及环黄芪醇能够有效发挥保护作用的浓度;②采用TUNEL、DAPI双染法检测环黄芪醇对Aβ1-42寡聚体诱导的bEnd.3细胞凋亡情况的影响;③运用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)FITC/PI染色法检测环黄芪醇干预后对寡聚体Aβ1-42寡聚体引起的bEnd.3细胞凋亡情况的影响;④采用单层bEnd.3细胞体外血脑屏障模型,探究环黄芪醇对脑内Aβ清除率的具体情况。⑤采用蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测凋亡蛋白(Cyto-C、Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase8)、连接蛋白(Occludin、Claudin-5、ZO-1)及转运蛋白(LRP-1、P-gp、RAGE)的表达水平,进一步明确其保护血脑屏障的具体机制。研究结果:1.本次共检索出124篇文献,根据纳排标准最后筛选出9篇临床随机对照试验,Meta分析结果显示:补肾益气方药治疗组能明显改善阿尔茨海默病患者日常生活能力评价量表(ADL)评分、简易精神状态量表(MMSE)评分,治疗前后差异具有统计学意义;安全性方面,本研究纳入的9篇文献中有6篇未描述有关不良反应内容,2篇未报导不良反应,仅1篇报道不良反应但对照组与治疗组间无统计学意义;2.MTT实验检测结果提示:(1)当采用20mol·L-1的寡聚体Aβ1-42分别损伤24h时,Aβ1-42对bEnd.3细胞活力的抑制率接近50%;(2)浓度达到100μmol·L/1的环黄芪醇溶液对bErnd.3细胞产生抑制作用;(3)10-75imol·L-1环黄芪醇对寡聚体Aβ1-42介导bEnd.3细胞活力损伤具有明显改善;3.Western blot实验结果显示:(1)bEnd.3细胞经环黄芪醇预处理过后由寡聚体Aβ1-42介导的线粒体和死亡受体通路相关蛋白的表达水平明显下降;内皮细胞之间的紧密连接蛋白表达水平上升。4.环黄芪醇可加快可溶性Aβ跨体外单层BBB模型的清除,其机制可能与增加P-gp和LRP-1的蛋白水平,而降低RAGE表达有关。研究结论:1.目前所纳入到临床随机对照试验显示,补肾益气方药可以改善阿尔茨海默病情况,但困于本组实验数据限制,相关用药安全性仍待考核。2.环黄芪醇可以通过调节寡聚体Aβ1-42改善bEnd.3细胞凋亡情况。3.环黄芪醇能抑制Aβ1-42导致的bEnd.3细胞凋亡,促进紧密连接蛋白产生,达到改善细胞间通透性的作用。4.环黄芪醇能够有效的调节血管内皮细胞上负责转运Aβ的相关转运蛋白达到提高脑内可溶性Aβ的有效清除率的作用。