【摘 要】
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第一部分,许多多肽或蛋白质以前体形式合成后,需要前体加工酶的剪切加工才能获得完全的生物活性.蛋白前体加工酶家族是一类Ca2+离子依赖性的丝氨酸蛋白酶,许多重要的生物生理
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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第一部分,许多多肽或蛋白质以前体形式合成后,需要前体加工酶的剪切加工才能获得完全的生物活性.蛋白前体加工酶家族是一类Ca2+离子依赖性的丝氨酸蛋白酶,许多重要的生物生理过程需要它的参与,如多肽与蛋白质激素的合成与分泌,膜受体的成熟与分泌,病毒外壳蛋白的加工活化等.至今为止,在哺乳动物中发现了7个家族成员包括Furin,PC1(又称为PC3),PC2,PACE4,PC4,PC6A/B(又称为PC5A/B),PC7(又称为PC8或LPC).第二部分,与王恩多课题组的姚永能同学合作进行了人源亮氨酰-tRNA合成酶的研究分析.人源线粒体亮氨酰-tRNA合成酶(human mitochondrial leucyl-tRNA synthetase,hmLeuRS)的cDNA已经从人胎儿脑组织cDNA库中被分离出来.为了研究hmLeuRS,我们克隆出其cDNA,将C-末端融合His6-tag的hmLeuRS在昆虫细胞中表达.从重组病毒感染的细胞分离得到线粒体经Ni-NTA层析柱纯化得到hmLeuRS-B蛋白,它的N-端经测序鉴定是"IYSATGKWTKEYTL".经由与cDNA推导出的hmLeuRS前体酶分子序列相比,可知hmLeuRS前体分子在输入到线粒体后,其N-端的Ser39和Ile40残基之间的肽键被蛋白水解酶专一性地切断,从而形成成熟的hmLeuRS0-B.缺失N-端21个氨基酸的hmLeuRS的基因已经在E.coli中进行过表达和研究,但结果很不理想.我们在昆虫系统中所表达的hmLeuRS0-B由于获得正确加工,其比活力相对较高,从而为今后实验的开展打下了一定基础.
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