血管紧张素转化酶(ACE)在高血压的预防和调节方面起着重要作用,目前已经从乳蛋白中分离出大量的ACE抑制肽。本课题以酪蛋白作为原料,通过双酶水解,得到含有ACE抑制肽的水解液,之后以葡聚糖凝胶、毛细管电泳、反相高效液相色谱、液质联用等实验方法进行分离和纯化分析。双酶水解过程,先胃蛋白酶、后胰蛋白酶依次对酪蛋白进行水解处理,制备ACE抑制肽。水解液经截留分子量为6Ku的超滤膜初步分离,再通过葡聚糖凝胶(Sephadex G-15)进一步纯化,对所得组分分别进行ACE活性的体外检测,并计算ACE活性的半数抑制率(IC50值)。之后对样品依次进行如下分析:毛细管电泳分析肽谱,反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析成分纯度,质谱联用(Q-TOF LC/MS)检测分子量范围,化学方法检测氨基酸组成,液质联用技术分析肽谱、检测氨基酸序列。实验结果表明,双酶水解产物的IC50值为560?g/mL;超滤流出物的IC50值为250?g/mL;Sephadex G-15分离得到3个组分,组分1的IC50值为123.41?g/mL,含有19个肽段;组分2的IC50值为66.67?g/mL,含有14个肽段;组分3的IC50值为64.29?g/mL,含有5个肽段。Q-TOF LC/MS测得三个组分的分子量范围为400~800u。对ACE抑制活性最高的组分3进行反相高效液相色谱分析,结果显示含有4个成分,其中有2个主成分。组分2经过化学酸降解检出缬氨酸、丝氨酸、脯氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、酪氨酸八种氨基酸,对应不同的蛋白组分(?1、?2、β、?)得到不同的氨基酸序列分别为:?1-LGYLEQLLR,FVAPFPEVFGK,YVPLGTQYTDAPSF;?2-YQKFPQYLQY;β-PVVVPPFLQPEVM;?-SRYPSYGLNYYQQKPV,INNQFLPYPY。组分3经过化学酸降解检出丝氨酸、酪氨酸两种氨基酸,其氨基酸序列只有三种可能,即Ser-Tyr(SY)、Tyr-Ser(YS)或者二者均有。