论文部分内容阅读
第一部分大鼠糖尿病心肌病实验模型制备及其评价目的:采用链脲佐菌素制备实验性糖尿病心肌病模型及其评价。方法:雄性SD大鼠60只,体重200±10g,随机分2组(n=30):正常对照组(CON),糖尿病组(DM)。CON组腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(p H4.2,5ml/kg);模型组腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60mg/5ml/kg)。72h后测血糖,1W内随机3次血糖值≥16.7mmol/L入选模型组。2组大鼠各分3批(n=10),分别1,2-丙二醇(5ml/kg·d)灌胃10d、30d或60d。实验前禁食12h,描记心电图,左心室插管测大鼠左心室血流动力学参数(HR、LVSP、LVDP、LVP±dp/dtmax)。结果:与同一时间的CON组比较,DM组血糖增加(P(27)0.05),体重、LVSP、LVP±dp/dtmax下降(P(27)0.05)。结论:大鼠腹腔注射60mg/kg STZ可制备糖尿病心肌病模型,表现为大鼠血糖升高,体重低下,左心室收缩、舒张功能下降。第二部分异甘草素对糖尿病心肌病大鼠的保护效应及机制目的:探讨异甘草素(Isoliquiritigenin,ISO)对糖尿病心肌病大鼠的保护效应及机制。方法:雄性SD大鼠50只,体重200±10g,分CON组(n=10)和DM组(n=40)。DM组大鼠上述DM模型制备后,随机分4组(n=9~10):DM对照组(DM)、不同剂量异甘草素处理组(ISO50、ISO100和ISO200)。CON和DM大鼠以1,2-丙二醇(5ml/kg·d)灌胃60d,ISO50、ISO100和ISO200组大鼠分别以不同剂量ISO(50、100、200mg/kg·d,等容积1,2-丙二醇为溶剂),每天1次,记录大鼠体重,连续60d。各组大鼠末次给药后,禁食12h,描记心电图,左心室插管测大鼠左心室血流动力学指标(HR、LVSP、LVDP、LVP±dp/dtmax);腹主动脉取血,测血糖、血脂四项(TG、TC、LDL-C、HDL-C)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST);取红细胞测Na+-K+-ATP酶;测血浆和心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT);HE染色观察心肌组织学结构;Masson染色观察心肌组织纤维化;透射电镜检查心肌细胞超微结构;免疫印迹检测心肌GLUT-1、GLUT-4、TNF-α、IGF-1、AKT和p AKT蛋白表达。结果:1、与CON组比较,DM组大鼠体重增长少;心电图心率减慢,心率变异度大;左心室血流动力学各参数(HR、LVSP、LVP±dp/dtmax)降低(P(27)0.05);血糖升高(P(27)0.05);血脂四项(TG、TC、LDL-C、HDL-C)无明显差别(P>0.05);血浆AST升高(P(27)0.05);红细胞测Na+-K+-ATP酶活性降低(P(27)0.05);血浆SOD、CAT活性降低(P(27)0.05);心肌组织MDA增多(P(27)0.05)、GSH-PX和GSH减少(P(27)0.05);HE染色显示心肌组织学结构损伤;Masson染色显示心肌组织纤维化;透射电镜检查心肌细胞超微结构显示,心肌细胞肌原纤维、线粒体结构异常;免疫印迹检测显示GLUT-1、GLUT-4表达减少(P(27)0.05),TNF-α表达增加(P(27)0.05)、AKT表达减少(P(27)0.05)。2、与DM组大鼠比较,ISO适宜剂量组大鼠体重增长多(P(27)0.05);心率回升,心率变异度减小;左心室血流动力学参数(LVP?dp/dtmax)回升(P(27)0.05);血糖无明显改变(P>0.05);血脂TG、LDL-C增高(P(27)0.05)、TC、HDL-C降低(P(27)0.05);血浆AST降低(P(27)0.05);红细胞测Na+-K+-ATP酶活性升高(P(27)0.05);血浆SOD活性升高(P(27)0.05);心肌组织MDA减少(P(27)0.05)、GSH-PX回升(P(27)0.05);HE染色显示心肌组织学结构损伤减轻;Masson染色显示心肌组织纤维化减少;透射电镜检查心肌细胞超微结构显示,心肌细胞肌原纤维、线粒体结构维持接近正常;免疫印迹检测显示GLUT-4表达回升(P(27)0.05),TNF-α表达减少(P(27)0.05)。结论:大鼠1次大剂量注射STZ饲养60天,可制备糖尿病心肌病模型表现为大鼠体重低下,心肌酶漏出,心肌功能、代谢、结构异常;适宜剂量异甘草素可保护糖尿病心肌病大鼠,改善体重增长,维持心肌功能、代谢、结构正常,其机制与增加心肌GLUT-4表达、减少心肌TNF-α蛋白表达有关。