目的:探讨Neuritin在不同表达水平下对肝细胞中Hsp60的影响及对肝细胞凋亡调节的分子机制。方法:将20盘含有Buffalo Rat Liver(BRL)肝细胞的100mm培养皿,随机分为4大组,分别为Neuritin低表达组、Neuritin高表达组、Hsp60低表达组、Hsp60高表达组。再将上述每一个大组分成五小组,对照组(n=1)和实验组(n=4),对照组不接受干预,Neuritin低表达组中实验组分别给予0.1ug/ml、0.3ug/ml、0.5ug/ml、0.7ug/ml的Neuritin抗体;Neuritin高表达组中实验组分别给予0.5ug/ml、1.0ug/ml、1.5ug/ml、2.0ug/ml的Neuritin蛋白;Hsp60低表达组中实验组分别给予0.6ug/ml、0.8ug/ml、1.0ug/ml、1.2ug/ml的Hsp60抗体;Hsp60高表达组中实验组分别给予10×10-3ug/ml、50×10-3ug/ml、100×10-3ug/ml、200×10-3ug/ml的Hsp60蛋白,48小时后使用免疫印迹试验(Western blotting)测定目标蛋白在对应干预条件下的表达变化水平。进一步采用细胞免疫荧光的方法检测Neuritin、Hsp60在肝细胞内的位置及共定位,最终讨论两者在肝细胞中的可能分子机制。结果:(1)与对照组相比,Western blotting表明实验组Neuritin蛋白在BRL细胞中的低表达及过表达,其相对表达程度渐渐减低和增高,而Caspase-3含量则是渐渐变多和减低,两者差异均有统计学意义(P<0.05);Hsp60蛋白含量基本一致。Neuritin相对表达量变化趋势与Caspase-3相对表达量变化趋势之间存在明显负相关性(r=-0.993,P<0.05)。(2)与对照组相比,Western blotting表明实验组Hsp60蛋白在BRL细胞中的低表达和过表达,其表达程度渐渐减低和增高,而Caspase-3含量却是渐渐变多和减低,两者差异均有统计学意义(P<0.05);Neuritin蛋白表达水平基本一致。Hsp60相对表达量变化趋势与Caspase-3相对表达量变化趋势之间同样存在明显负相关性(r=-0.996,P<0.05)。(3)Neuritin和Hsp60在细胞免疫荧光中Merge后定位在细胞膜。结论:(1)细胞免疫荧光证实Neuritin和Hsp60在肝细胞中共同定位在细胞膜,提示Neuritin和Hsp60蛋白存在相互作用。(2)Neuritin蛋白和凋亡蛋白Caspase-3表达呈现相反的变化趋势,Hsp60蛋白和凋亡蛋白Caspase-3的表达也呈现相反的变化趋势,由此推测Neuritin和Hsp60可能通过某种协同作用共同参与肝细胞的抗凋亡调控机制。