研究背景虽然恶性肿瘤的诊疗已取得飞跃式的进步,但无论是放疗和化疗,靶向疗法和免疫疗法,其产生的耐药及毒副作用都是制约临床治疗效果的瓶颈[1]。据统计,约有三分之一的癌症患者死于放疗和化疗引起的各种毒副作用,主要为免疫力下降导致的免疫功能抑制以及组织器官的损伤,严重影响患者生存质量[2]。肾脏损伤是许多一线化疗药物,如多西他赛、顺铂、多柔比星等治疗过程常见的毒副作用[3],当肾脏受损,废物会集聚在体内,严重时可能致死[4]。其中顺铂是广谱抗癌药物,用于治疗多种快速生长的实体瘤,如非小细胞肺癌[5]。然而,顺铂具有一系列毒副作用,在这些副作用中,以急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)为主,而且肾脏的损伤程度和顺铂的剂量呈正相关性[6,7]。为了减轻药物的毒副作用、提高药效,采用联合用药、提高药物选择性或者辅助用药等都是缓解或降低药物毒副作用的有效手段。天然产物具有种类繁多、结构新颖、多靶点多途径、毒副作用小、生物活性多样化等特点[8],不仅是新药研发的重要资源,也为疾病辅助治疗、提高免疫力、降低毒性提供思路。现有研究成果显示,多种中药来源的天然产物具有免疫调节效应,在治疗肿瘤、自身免疫性疾病等重大疾病中发挥重要作用[9]。我们利用天然产物的特点,筛选发现了无明显毒副作用的SOP天然混合组分,且能显著降低化疗药物的毒副作用。本论文将分析天然水解产物SOP在荷瘤小鼠中的基本功能,以及其联用化疗药顺铂是否可以减轻其肾脏毒性的作用,并初步探讨其作用机制。研究结果第一部分天然水解产物SOP减毒增效作用的分析1.化疗药物的选择化疗药物多西他赛和顺铂是用于治疗肺癌、乳腺癌、前列腺癌的临床一线抗肿瘤药物,针对前列腺癌而言,多西他赛是唯一能够适度提高生存率的药物。但他们同样具有严重的毒副作用,如免疫功能抑制和组织器官损伤。我们首先利用前列腺癌和肺癌为模型,分析SOP对多西他赛和顺铂药效、毒性的影响。2.SOP的毒性分析利用荷瘤小鼠分析SOP的毒性,通过皮下接种鼠源前列腺癌细胞RM1、鼠源肺癌LLC细胞,构建C57BL/6异种移植荷瘤老鼠模型,发现单独加SOP小鼠的体重和状态均与正常小鼠无异,说明SOP对于机体无毒。3.SOP对化疗药物的增效作用对于单用化疗药物多西他赛,肿瘤抑制率为65.3%,联合SOP使用,肿瘤抑制率为59.3%,基本不影响多西他赛的抑瘤效果,对于单用化疗药物顺铂,抑瘤率为74.3%,联合SOP使用,抑瘤率为72.8%,不影响化疗药物的抑瘤作用。4.SOP对化疗药物毒性的影响通过检测肝脏(AST和ALT)和肾脏(CR和BUN)功能指标,各组ALT和AST没有明显变化,顺铂组BUN和CR有显著性升高,联用SOP以后BUN和CR有明显降低。说明SOP对肾毒性有更明显的作用。5.SOP减毒增效的免疫机制通过组织HE染色,发现联用SOP后,其炎症水平降低,通过检测T淋巴细胞基本的免疫指标CD3+、CD4+、CD8+和巨噬细胞F4/80、CD11b发现,联合用药组CD8+低于对照组,CD3+、CD4+、CD4 +/CD8+高于对照组,联合用药组的巨噬细胞含量要高于化疗药组,说明SOP可以刺激机体免疫。第二部分SOP降低顺铂诱导的急性肾损伤的作用及机制分析1.急性肾损伤模型的构建根据文献查阅,我们使用不同剂量的顺铂一次性腹腔注射,作用不同的时间来寻找一个最适合的剂量和时间来构建成功小鼠的急性肾损伤模型,以便后续的研究,最终通过对血清中肌酐(CR)和尿素氮(BUN)的检测结果以及对小鼠肾脏病理学状态的观察,我们确定了使用15mg/kg的顺铂剂量一次性腹腔注射作用五天的时间以成功构建小鼠的急性肾损伤模型,进行我们后续的机制研究。2.SOP对急性肾损伤的保护作用顺铂引起肾脏组织损伤,血清中BUN和CR的含量下降明显,使用SOP后,BUN和CR含量恢复,具有明显的统计学差异,通过qPCR检测各种细胞因子水平,发现某些抗炎因子水平升高,炎症因子水平降低,因此,天然水解产物SOP对化疗药顺铂引起的肾损伤有一定的保护作用,它可能是通过细胞因子的表达来调节的。结论1.天然水解产物SOP有一定的抑瘤作用,并且对多西他赛和顺铂具有一定的增效作用;2.SOP与多西他赛、顺铂联用,能够显著降低化疗药物的肝肾毒性,可以提高小鼠的免疫力,改善小鼠的生存质量;3.SOP对于顺铂诱导的急性肾损伤具有显著的保护作用。创新点与不足1.创新点:(1)SOP作为一种可口服,安全无毒的天然产物,可与化疗药物多西他赛、顺铂联用,具有一定的增效作用,对药物引起的毒副作用有显著的抑制作用,显著提高了小鼠的生活质量。(2)SOP对免疫系统的激活作用,可能是化疗药物发挥减毒增效作用的机制之(3)SOP对顺铂引起的急性肾损伤有显著的保护作用。。2.不足之处:(1)SOP对多西他赛和顺铂协同联用的机制尚需进一步探讨,特别是荷瘤病理条件下的免疫机制研究不细致。(2)在正常生理条件下,未分析SOP对免疫系统的影响。