肌间脂肪含量是影响牛肉的多汁性和口味的重要因素之一,通常可直接由目测大理石花纹程度的方法直接评定。在大多数国家,肌间脂肪含量是生产者和消费者共同关注的一个生产性状,而这个性状又受到诸如品种、性别、年龄和营养等其他因素的影响。长白山黑牛(由日本和牛与中国本土延边黄牛杂交而成的F1代商品牛)和中国草原红牛(由英国短角牛、本地内蒙古牛和利木赞牛杂交而成)为两种杂交肉牛,其中中国草原红牛已被认定为我国拥有自主知识产权的肉牛品种。它们有着不同的眼肌肌间脂肪沉积能力。中国草原红牛与长白山黑牛相比,肌间脂肪沉积能力有着明显的不足。本研究的目的在于寻找两种肉牛眼肌中的差异表达蛋白,进而为探求导致肉牛形成不同脂肪沉积能力的原因以及肉的品质的鉴定和脂肪形成、代谢的分子机制提供理论依据。因此本研究利用荧光双向电泳结合生物质谱技术,以中国草原红牛和长白山黑牛眼肌为研究对象,寻找在眼肌中差异表达的蛋白质,并利用蛋白质免疫印迹以及实时荧光定量RT-PCR验证,为探索牛肉质性状中脂肪沉积和代谢的分子生物学机制及肉牛的育种改良提供依据。研究结果表明,有27个蛋白点、共20种蛋白质存在1.5倍以上的差异表达,它们是肌钙蛋白T1、肌钙蛋白I2、肌钙蛋白T3、肌红蛋白、血红蛋白α链、血红蛋白β链、肌球蛋白轻链1、肌球蛋白轻链2、肌球蛋白轻链6B、甲硫氨酸亚砜还原酶A、肌肉型磷酸甘油酸酯变位酶、热休克蛋白B1、磷酸丙糖异构酶1、肌节蛋白、蛋白酶体1α亚基、硫氧还蛋白、细胞膜孔蛋白、细胞色素C6B1、谷胱甘肽硫转移酶mu1、谷胱甘肽硫转移酶pi1。实时荧光定量RT-PCR及免疫印迹实验表明,并非所有差异表达蛋白质的mRNA相对表达量与其蛋白质相对表达量一致,热休克蛋白B1、谷胱甘肽硫转移酶pi1的蛋白质表达情况与它们的mRNA表达情况相反。这可能是由于这些蛋白质存在翻译后修饰作用或其他必要的生物学功能而造成的。差异表达的蛋白质的功能涉及到糖酵解、糖异生、糖原异生、果糖以及甘露糖代谢、肌醇磷酸盐代谢、嘧啶代谢、钙信号传导、谷胱甘肽代谢、肌纤维成长、应激反应、氧化还原修复等生物学通路。因此,脂肪沉积能力受到以上通路的影响,而在本研究中被鉴定的差异表达蛋白则可能在这些通路中起到影响脂肪沉积的关键性作用。