背景:卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是多种致命性淋巴瘤诸如原发性渗出性淋巴瘤(PEL)和多中心卡斯特曼病的致病因子,在感染细胞后,KSHV的生命周期分为潜伏感染期(Latency)和裂解复制期(Lytic replication)。类似于HIV彻底治疗,根除KSHV的关键是将潜伏状态下的KSHV激活转向裂解复制状态。表观遗传修饰是激活KSHV裂解复制的重要方式之一。抑制宿主组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)能够增强KSHV基因组的复制。但是目前对于HDAC1抑制后的KSHV基因组上乙酰化修饰机制仍不清除。本研究构建了稳定抑制去乙酰化酶(HDAC1)的KSHV感染的B细胞淋巴瘤(BCBL1),并对KSHV乙酰化修饰位点进行了初步研究。目的:利用CRISPR/Cas9构建稳定抑制HDAC1表达的BCBL1细胞系;阐明HDAC1敲除后对KSHV基因的影响;染色质免疫共沉淀(ChIP)研究HDAC1敲除后KSHV基因组上被乙酰化修饰的位点。方法:1.构建针对人类HDAC1的sgRNA的慢病毒表达质粒LentiCRISPRv2-sgHDAC1,并将构建质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包装LentiCRIPSRv2-sgHDAC1的慢病毒;2.慢病毒感染BCBL1细胞,并使用嘌呤霉素筛选构建的细胞系。使用Western Blotting检测构建细胞系的HDAC1蛋白表达水平以及组蛋白乙酰化水平;使用实时定量荧光PCR检测构建细胞系中HDAC1的mRNA水平以及KSHV裂解期及潜伏期基因的表达;3.摸索ChIP中超声波破碎的条件;4.进行ChIP并验证免疫沉淀效果;并通过ChIP-qPCR技术对DNA进行初步分析乙酰化作用位点。结果:1.构建3组LentiCRISPRv2-sgHDAC1表达质粒,并包装慢病毒;2.筛选感染的BCBL1细胞,Western Blotting检测结果显示HDAC1的表达水平明显降低80%;同时KSHV基因表达水平显著上升;3.探索ChIP实验的条件,初步完成ChIP试验;4.利用ChIP-qPCR技术初步得知KSHV基因组上乙酰化修饰的位点。结论:1.筛选出两株HDAC1表达水平显著降低的BCBL1细胞系;2.研究发现筛选的BCBL1中HDAC1表达水平显著下降,而KSHV裂解相关基因RTA、K8等表达水平显著上升;3.研究发现筛选的BCBL1中HDAC1表达水平显著下降,而KSHV基因RTA、K7乙酰化修饰水平上升,可能是KSHV表观遗传修饰位点。