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自然杂交在植物中是一种常见的现象,对植物物种形成与进化具有重要的作用。醉鱼草属植物的自然杂交极容易发生,但目前没有分子方面的相关报道。在野外收集种质资源时,发现昆明西山地区具有表型特征介于密蒙花和皱叶醉鱼草之间的植株,通过表观形态性状难以对其分类地位进行准确确定。本研究通过形态性状比较分析、花粉微形态扫描、繁殖生物学与分子生物学的方法为密蒙花与皱叶醉鱼草自然杂交的发生提供支持证据,验证中间形态性状个体是否由两个亲本自然杂交形成,并初步分析了疑似杂交个体与亲本的遗传组成,主要结果如下: 1.形态性状比较 选取了5个质量性状和9个数量性状进行比较,通过对选取性状的观察和测量,初步确定了所发现的疑似杂交个体是由密蒙花和皱叶醉鱼草自然杂交形成的。疑似杂交个体在所选取的性状中,有9个性状为中间性状,6个与皱叶醉鱼草没有显著差异。结果表明中间形态性状在疑似杂交个体中较为普遍,并且其在形态上更加接近于皱叶醉鱼草。 2.花粉微形态扫描 通过扫描电子显微镜进行花粉形态扫描发现,密蒙花、皱叶醉鱼草与疑似杂交个体花粉形态极其相似,密蒙花花粉外壁纹饰的表面穿孔分布较稀且较小,花粉表面分布有未穿孔的小凹槽,而皱叶醉鱼草与疑似杂交个体则具有一致的外壁纹饰。但是这种微小的差异在亲本与杂交个体的鉴别上是相对困难的。 3.繁殖生物学 采用气相色谱-质谱联用技术对动态吸附法收集的挥发性花气味成分进行分析,并用气相色谱面积归一化法对各成分进行了定量。密蒙花、皱叶醉鱼草与疑似杂交个体花气味中吸引昆虫传粉的主要成分苯甲醛、芳樟醇、2,6,6-三甲基-2-环己烷-1,4-二酮含量较高,为杂交的发生提供可能性。 人工相互授粉实验与种子活力测定结果表明,不同处理的座果率从6%到84%不等,密蒙花与皱叶醉鱼草分别进行种内自交后的每个果实的平均结籽率几乎没有差异,但均显著大于其他处理(约65 vs0.43-8)。大部分处理均不同程度的产生了具有活力的种子,证明密蒙花、皱叶醉鱼草与疑似杂交个体之间容易发生杂交。疑似杂交个体与两亲本均能回交产生少数具有活力的种子可能导致物种间产生基因流。 4.分子生物学证据 通过比较分析4个低拷贝和一个多拷贝ETS核基因片段的变异位点,单倍型分析结果显示大部分密蒙花与皱叶醉鱼草能够被明显的区分成两个组,大部分疑似杂交个体分别具有来自这两个组的单倍型。通过遗传结构分析表明大部分疑似杂交个体均为F1代,证明了这些具有中间形态性状的植物确实是由密蒙花和皱叶醉鱼草自然杂交形成的,而且这一杂交过程中存在不对称的基因渗入现象,渗入的主要方向是由密蒙花流向皱叶醉鱼草。