目的：氧化自由基是机体氧化反应中产生的有害物质，具有强氧化性，能够损害机体的组织和细胞，引起慢性疾病，自由基能产生在人体的任何部位，许多炎症相关疾病的产生都与体内过多的自由基有关。花生四烯酸通路为经典的炎症通路，cPLA2、COX-2是花生四烯酸反应中的关键酶，催化产生PGE2等炎症因子的产生。氧化自由基及许多炎症因子能够激活花生四烯酸通路，产生炎症反应，许多抗炎药物通过减少氧化自由基的产生，调控cPLA2-COX2-PGE2分子表达达到抗炎作用。老瓜头（Cynanchum komarovii Al.Iijinski，CK）又名牛心朴子，主要分布在宁夏等荒漠草原上，资源丰富。上世纪90年代从老瓜头全草中提取了老瓜头生物总碱（Total Alkaloid of Cynanchum Komarovii AI.Icjinski，TACKI），体内实验表明TACKI对佐剂性关节炎大鼠、气囊滑膜炎大鼠有抗炎作用，本实验主要从体外说明TACKI抗氧化作用，并能够通过调控cPLA2-COX2-PGE2分子水平达到抗炎作用。　　第一部分:老瓜头生物总碱体外抗氧化作用的研究　　目的:通过体外化学方法研究TACKI的抗氧化作用。　　方法：将老瓜头生物总碱和维生素C分为0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1药物浓度组。还原性药物能将铁氰化钾还原成亚铁氰化钾，在700nm波长处有最大吸光度以此反映药物的还原力，利用硫酸亚铁与过氧化氢反应生成羟自由基，测510nm药物对羟自由基的清除率，对过氧化氢引起红细胞膜损伤的保护作用，测在415nm下的吸光度值，用硫代巴比妥酸法测药物对肝脂质过氧化物MDA的清除能力，在532nm处有最大吸收。通过体外测定还原力，羟自由基的清除率，对红细胞膜的保护作用，对肝脂质过氧化物MDA的清除能力研究TACKI的体外抗氧化作用。　　结果：TACKI0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1浓度组与相应浓度维生素C相比，还原力均较弱（P<0.01）；在0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1浓度组TACKI与维生素C相比，对羟自由基的清除能力强（P<0.01）；TACKI浓度为0.2、0.4mg·mL-1时对红细胞膜的抑制作用与维生素C相比有统计学差异（P<0.05）；质量浓度为0.8、1.6mg·mL-1TACKI对小鼠肝匀浆自发氧化生成MDA有抑制作用，其效应强于相应浓度维生素C（P<0.01）。　　结论：TACKI还原力较相应浓度维生素C弱但有较强的清除自由基的能力。　　第二部分:老瓜头生物总碱对cPLA2-COX2-PGE2分子水平的影响　　目的:通过确定TACKI作用于RAW264.7巨噬细胞系的药物浓度及对细胞活性的影响，研究TACKI对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7在cPLA2-COX2-PGE2分子系统的调控作用。　　方法：1、RAW264.7细胞的复苏、培养、传代、冻存及实验前处理。　　2、采用LPS诱导RAW264.7细胞作为炎症模型，以非甾体抗炎药选择性COX-2酶抑制剂塞来昔布（Celecoxib）作为阳性对照。　　3、通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法确定TACKI作用于RAW264.7的24h、48h、72h的量效曲线。　　4、通过上述量效曲线确定TACKI孵育RAW264.7细胞的药物浓度。利用MTT比色法确定此组药物浓度及阳性对照对RAW264.7细胞的毒性作用。　　5、LPS长时间刺激RAW264.7，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中前列腺素-E2（PGE2）的含量，半定量RT-PCR检测RAW264.7细胞中COX-2mRNA的表达，免疫荧光法检测COX-2的蛋白表达，Western blotting法检测cPLA2、COX-2蛋白表达。　　结果：TACKI药物浓度为0.01μg·L-1,0.1μg·L-1,1μg·L-1无细胞毒性；与LPS组比较，TACKI(0.01μg·L-1,0.1μg·L-1,1μg·L-1)能降低PGE2的含量（P<0.05），TACKI（0.01μg·L-1,0.1μg·L-1,1μg·L-1）可下调COX-2mRNA的表达（P<0.05），通过免疫荧光观察，COX-2蛋白在细胞浆中表达，1μg·L-1TACKI能明显减少COX-2蛋白的表达；通过Western blotting得出TACKI（0.01μg·L-1,0.1μg·L-1,1μg·L-1）的条带明显变细，与LPS组比较，TACKI能明显减少COX-2及cPLA2的蛋白表达（P<0.05）。　　结论：TACKI减弱LPS诱导RAW264.7细胞中炎症因子PGE2，对LPS诱导RAW264.7细胞中cPLA2的蛋白表达,COX-2基因表达及蛋白表达抑制作用明显。