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目的： 1.探究六月青石油醚萃取物（LYQPE）及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长的最适时间。 2.根据所得最适时间研究LYQPE及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45效应的部分作用机理。 方法： 根据预实验摸索出的药物作用浓度，直接加药法设40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml和320μg/ml LYQPE四个剂量组；血清药理学法设3.75％、7.5%和15%三个 LYQPE大鼠含药血清剂量组，大鼠血清总含量为15%，不足的量用生理盐水大鼠血清补齐： 1.LYQPE及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长的最适时间：SGC-7901和MKN-45与LYQPE及其含药血清分别共同培养24h、48h和72h。MTT法结合倒臵显微镜下观察确定能显著抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45增殖的最适时间。 2.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞周期分布的影响和G0/G1期阻滞相关基因cyclin D1 mRNA表达的检测：SGC-7901和MKN-45与LYQPE及其含药血清分别共同培养48h。流式细胞仪检测细胞周期分布的变化；半定量RT-PCR检测LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的cyclin D1 mRNA相对表达量的改变。 3.LYQPE及其含药血清作用48h在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡的影响：运用Hoechst33258荧光染料染色观察LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡的形态学改变，运用流式细胞术检测LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡及其相关基因P53蛋白表达的变化；运用半定量RT-PCR检测LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡相关基因P53 mRNA表达的变化；运用电子显微镜观察LYQPE160μg/ml及其含药血清15%作用前后胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的超微结构的改变。 4.LYQPE及其含药血清作用48h在体外对胃癌细胞SGC-7901黏附基因CD44 mRNA的影响：采用半定量RT-PCR检测LYQPE及其含药血清作用前后胃癌细胞SGC-7901的黏附基因CD44 mRNA的变化。 结果： 1.LYQPE及其含药血清在体外抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长的最适时间：MTT检测显示，各作用时间各药物组都呈时间和剂量依赖性的抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45增殖，综合考虑，48h是研究LYQPE及其含药血清在体外抗胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的最适时间，24h达不到最佳效果，72h效果稍有增强，但周期太长，操作不容易控制；倒臵显微镜下观察，药物作用48h时，各药物组剂量越高，SGC-7901和MKN-45生长状态越差，细胞贴壁不完全，容易脱落，高剂量组细胞多漂浮。 2.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞周期分布的影响和G0/G1期阻滞相关基因cyclin D1 mRNA表达的检测：LYQPE及其含药血清各剂量组作用48h后，与各自对照组相比较，SGC-7901和MKN-45 G0/G1期细胞不同比例的增加，且有明显的量效关系，除直接加药40μg/ml对SGC-7901 G0/G1期细胞的增加没有统计学意义，其他皆有显著差异（P<0.01），G2/M和S期细胞数量比例变化不规律；与各自对照组相比较，LYQPE及其含药血清各剂量组作用48 h后，SGC-7901和MKN-45cyclin D1的mRNA相对表达量呈剂量依赖性降低，对于SGC-7901，除了直接加药的40μg/ml和含药血清的3.75%两个剂量，其他都有统计学差异(P<0.05或P<0.01），对于MKN-45，只有直接加药的40μg/ml没有明显的统计学差异，其他都有显著统计学差异（P<0.01）。 3.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45细胞凋亡的影响：药物作用48h后，Hoechst33258检测细胞凋亡发现，随着LYQPE及其含药血清浓度的增加，SGC-7901和MKN-45细胞凋亡率逐渐上升，与各自对照组相比，除了SGC-7901含药血清的3.75%，其余都有统计学差异（P<0.05或 P<0.01）；流式细胞术检测凋亡发现，与各自对照组相比，LYQPE及其含药血清各药物剂量组SGC-7901和MKN-45细胞凋亡状况变化皆有统计学差异（P<0.01），且正常细胞比例呈剂量依赖性下降，对于SGC-7901，直接加药凋亡高峰剂量为80μg/ml，含药血清为15%，对于MKN-45，直接加药凋亡高峰剂量为320μg/ml，含药血清为7.5%；流式细胞术检测P53蛋白显示，LYQPE及其含药血清在体外有减少SGC-7901 P53蛋白表达，增加MKN-45 P53蛋白表达的作用，与各自对照组比较，除了直接加药对MKN-45的40μg/ml，其他组都有显著的统计学差异（P<0.01）；RT-PCR检测P53显示，LYQPE及其含药血清在体外有减少SGC-7901 P53 mRNA表达，增加MKN-45 P53 mRNA表达的作用，与流式细胞术检测P53蛋白所得结果趋势相同，与各自对照组比较，低剂量只有直接加药对MKN-45有差异，其他组的低剂量效果均不明显，但高剂量都有统计学差异（P<0.05或P<0.01）；透射电镜下SGC-7901和MKN-45各对照组标本的绝大部分细胞结构完整，胞质、核质匀称，细胞器丰富清晰，加药组的标本中可见细胞结构被不同程度的破坏，细胞器模糊，大量气泡，核变形，碎裂，消失，可见凋亡细胞和坏死细胞。 4.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞 SGC-7901黏附基因CD44的影响：与各自对照组相比较，LYQPE及其含药血清各剂量组作用48h后，SGC-7901 CD44的mRNA相对表达量呈剂量依赖性降低，除了直接加药的40μg/ml，其他都有统计学差异（P<0.05或P<0.01）。 结论： 1.LYQPE及其含药血清在体外能够显著抑制胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的增殖，其作用强度与浓度和作用时间密切相关，48h是进行后续研究的最适时间。 2.LYQPE及其含药血清在体外对胃癌细胞SGC-7901和MKN-45有G0/G1期阻滞作用，且可能跟下调cyclin D1 mRNA转录有关。 3.LYQPE及其含药血清在体外可诱导胃癌细胞SGC-7901和MKN-45凋亡，高浓度可致其坏死，下调P53 mRNA转录和翻译水平可能是其相关分子机制之一。 4.LYQPE及其含药血清在体外可影响胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的超微结构，从而抑制其增殖。 5.LYQPE及其含药血清在体外可减少胃癌细胞SGC-7901 CD44的mRNA表达强度，可能是导致细胞脱落漂浮的机制之一。