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原发性肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称肝癌)是临床上最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率逐年增加。化学治疗在肝癌治疗中占有重要地位,但肿瘤细胞的多药耐药性常常导致化疗失败。耐药逆转剂的应用是克服肿瘤多药耐药性的重要手段,但多数已被证实的多药耐药逆转剂均因毒副作用较大而限制了其临床的广泛应用。目前,有研究报道细胞信号传导通路抑制剂能够逆转肿瘤多药耐药性。索拉非尼是一种多靶点抗肿瘤药物,能够通过抑制ERK1/2信号传导通路发挥抗肿瘤作用。目的:探讨索拉非尼能否逆转人肝癌细胞株HepG2/GEM对吉西他滨(GEM)的耐药性,并进一步探讨其产生逆转作用的可能机制。方法:MTT法检测人肝癌HepG2细胞株对吉西他滨(GEM)、伊立替康(CPT-11)、紫杉醇(TAX)、表阿霉素(EPI-ADM)、奥沙利铂(OXA)五种化疗药物的敏感性;选用敏感度较高的GEM,采用药物大剂量冲击方法诱导建立人肝癌耐药细胞株HepG2/GEM;以抑制率10%索拉非尼浓度处理HepG2和HepG2/GEM后,MTT法检测两种肿瘤细胞对GEM的敏感性的变化,RT-PCR、Western blot方法检测索拉非尼作用后HepG2、HepG2/GEM的MDR-1/P-gp、ERK、VEGFR-2表达情况。结果:1.药物筛选一倍血浆锋峰浓度(PPC)的GEM、CPT-11、TAX、EPI-ADM、OXA对肝癌HepG2细胞株72小时的抑制率分别为:63.98%、58.02%、55.82%、64.42%、48.53%。2.采用药物大剂量间断冲击法,建立了人肝癌HepG2/GEM耐药细胞模型。用MTT法测得GEM对HepG2/GEM细胞株72小时的IC50为12.10ug/ml,对亲本细胞为1.04 ,耐药倍数为11.63倍。3.索拉非尼对HepG2,HepG2/GEM细胞抑制率检测1μg/ml的索拉非尼对HepG2,HepG2/GEM细胞无明显抑制作用,超过此浓度呈剂量效应关系,索拉非尼对HepG2,HepG2/GEM的IC50分别为4.38μg/ml,4.84μg/ml。4.1μg/ml的索拉非尼可导致GEM对HepG2/GEM的IC50明显降低,逆转倍数为3.08倍。HepG2细胞株经索拉非尼作用前后,GEM对其IC50无明显变化。5. RT-PCR HepG2/GEM经1μg/ml的索拉非尼作用72h后,其MDR-1、ERK、VEGFR-2mRNA表达强度明显下降,但仍高于HepG2细胞的表达;HepG2细胞的目的基因表达明显弱于HepG2/GEM细胞,且经索拉非尼作用后无显著变化。6.Western blot HepG2/GEM经1μg/ml索拉非尼作用72h后,P-gp、VEGFR-2表达明显下降,但仍高于HepG2细胞;HepG2细胞的P-gp、VEGFR-2表达明显弱于HepG2/GEM细胞,且索拉非尼作用后无显著变化。结论:1.人肝癌HepG2细胞株对GEM、CPT-11、TAX、EPI-ADM中度敏感,对OXA低度敏感。2.人肝癌HepG2细胞株经GEM大剂量间断冲击后对GEM产生获得性耐药,为肿瘤耐药研究提供理想耐药细胞模型。3.索拉非尼与吉西他滨之间无交叉耐药。4.索拉非尼具有体外逆转HepG2/GEM细胞株耐药性的作用。可能与抑制VEGFR-2及ERK1/2信号传导通路,从而下调MDR-1表达有关。