背景和目的　　 食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤。由于食管癌进展快,易发生浸润和淋巴结转移,加上术后化疗药物副作用大,肿瘤对化疗药物易产生抵抗性,因此,多数食管癌患者预后不佳。寻找安全、副作用小、对肿瘤特异的有效抗肿瘤药物是医学界的重大课题。　　 核转录因子κB(nuclear transcription factor kappaB,NF-κB)是由Sen和Baltimore在二十多年前发现的一种蛋白质。它可以激活与肿瘤增殖、浸润、转移和凋亡有关的重要基因的表达,大量的研究表明,食管癌中有NF-κB的持续性表达,它与食管癌的发生、浸润、转移和抗凋亡密切相关。　　 小白菊内酯(parthenolide,PN)是墨西哥印第安药用植物小白菊的化学成分,具有抗炎作用。最近发现其对多种肿瘤都有抑制作用；与化疗药物联合使用可以增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,而对正常细胞无杀伤作用。据报道,PN是NF-κB的有效抑制剂,通过抑制NF-κB的活化,抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡。　　 目前,小白菊内酯对食管癌的研究报道极少,本实验以人食管癌细胞株EC9706为研究对象,研究PN对食管癌细胞的增殖和凋亡的影响,探讨PN抗肿瘤的机制。　　 材料与方法　　 1.标本:人食管癌细胞EC9706由中国医学科学院肿瘤研究所王明荣教授惠赠,河南省肿瘤病理重点实验室冻存。经复苏孵育,传代培养,分为不同的实验组。　　 2.倒置显微镜观察不同浓度PN作用EC9706细胞24h、48h、72h后形态学变化。　　 3.采用MTT法检测不同浓度PN及PN与5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)联合作用EC9706细胞24h、48h、72h后,细胞增殖活性的变化。　　 4.采用免疫细胞化学SP法检测各组EC9706细胞中血管内皮生长因子(vescular endothelium growth factor,VEGF)、NF-κBp65蛋白和Ki-67抗原表达。　　 5.采用原位杂交技术检测各组EC9706细胞中NF-κBp65mRNA表达。　　 6.采用流式细胞技术检测各组EC9706细胞的凋亡变化情况。　　 7.采用SPSS10.0统计软件进行统计分析。计量资料的数据用均数±标准差(X±S)表示,MTT实验结果采用重复测量资料的方差分析；两组以上均数的比较用单因素方差分析；以α=0.05为显著性检验水准。　　 结果：　　 1.在倒置显微镜下,食管癌细胞EC9706呈多边形,对数生长期的EC9706常融合成片,细胞连接紧密。实验组EC9706细胞与对照组相比,细胞数量减少,细胞连接消失,高浓度PN作用后所有细胞固缩变圆,核浓缩、核浆分布不清,细胞溶解碎裂。溶剂对照组未出现上述变化。　　 2.MTT实验结果:20μmol/L的PN对EC9706细胞的增殖有抑制作用,抑制率为8.64％。不同浓度的PN(20-100μmol/L)、5-FU(25μg/mL和50μg/mL)及PN(20μmol/L)与5-FU(25μg/mL)联合作用于EC9706细胞24h、48h和72h后均不同程度的抑制细胞增殖。同一时间段内不同浓度组间比较差异有统计学意义(F=203.392,P<0.05),相同的浓度不同作用时间组的比较差异有统计学意义(F=401.093,P<0.05),时间组和浓度组间有交互作用(F=15.604,P<0.05)。PN100μmol/L24h的抑制率为39.39％,48h为48.03％,72h时间段PN40μmol/L和50μmol/L组的抑制率达45.56％和50.05％。溶剂对照组的抑制率在2.67％-5.59％之间,与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组24h的抑制率(66.53％)与5-FU50μg/mL作用48h的抑制率(64.07％)相当；联合组48h的抑制率(92.37％)与5-FU50μg/mL作用72h的抑制率(93.16％)相当。　　 3.细胞免疫化学结果:食管癌EC9706细胞高表达VEGF、NF-κBp65蛋白和Ki-67抗原。不同浓度的PN(20-50μmol/L)、5-FU(25μg/mL)及PN(20μmol/L)与5-FU(25μg/mL)联合作用EC9706细胞24h、48h和72h后VEGF、NF-κBp65蛋白和Ki-67抗原表达逐渐降低,三个时间段不同浓度组间的比较及相同浓度不同作用时间的比较差异有统计学意义(P<0.05),PN抑制EC9706细胞中VEGF、NF-κBp65蛋白和Ki-67抗原表达具有时间和剂量依赖性。5-FU(25μg/mL)组中NF-κBp65蛋白的表达与对照组比较略有升高。与5-FU(25μg/mL)组相比,联合组中EC9706细胞中NF-κBp65蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。　　 4.原位杂交结果:食管癌EC9706细胞中NF-κBp65mRNA活性高,不同浓度的PN(20-50μmol/L)作用EC9706细胞24h、48h和72h后NF-κBp65mRNA活性逐渐降低,三个时间段内不同浓度组间的比较及相同浓度不同时间段的比较差异均有统计学意义(P<0.05),PN抑制EC9706细胞中NF-κBp65mRNA的活性具有时间和剂量依赖性；5-FU(25μg/mL)组EC9706细胞中NF-κBp65mRNA活性略有增强；联合组NF-κBp65mRNA的活性明显降低,与单一5-FU组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。　　 5.流式细胞术结果:三个时间段不同浓度PN组、单一5-FU组和联合组与对照组比较,细胞早期凋亡率和晚期凋亡率的差异均有统计学意义(P＜0.05)；相同浓度不同作用时间组的早期凋亡率和晚期调亡率的差异均有统计学意义(P<0.05)。各组两两比较差异有统计学意义(P＜0.05)。　　 结论：　　 1.小白菊内酯可以抑制食管癌EC9706细胞增殖,诱导细胞凋亡。　　 2小白菊内酯可以增加EC9706对化疗药5-FU的敏感性。　　 3.小白菊内酯抗肿瘤机制可能与抑制NF-κB有关。