莱克多巴胺、已烯雌酚、甲硝唑的抗原合成及酶联免疫检测法的建立

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随着中国的近些年经济的发展以及在国际中地位的提高,中国的食品的世界化贸易也有了很大发展,现在的生活水平使得人们对各种肉类食品的需求有了极大的增长,以至现在的畜牧业和养殖业在中国也得到了迅速的发展。然而,由于绝大多数的养殖户缺乏科学知识和法律、健康等方面的常识,再加上有巨大的经济利益的驱使,很多的养殖户均超标使用药物或滥用违各种禁药物,近几年来从三聚氰胺到瘦肉精,各种有害抗生素添加剂和生长促进剂的残留不仅危害到消费者的身体健康,对人体产生诸如致癌,致突变等毒副作用,引起细菌耐药性的增加,而且同时影响我国畜禽产品的进出口贸易。目前,食品中药物残留检测方法主要有色谱法、免疫法和微生物检测法。色谱法优点是测定精确,但是仪器昂贵,前处理较麻烦且要求专业人员操作,无法实现大量快速检测,微生物法简单,但只能定性分析,不能定量分析,往往会高出最高检测量,灵敏度不高。而我们所研究的酶联免疫法克服了以上方法的缺点,既可以大批量定性分析,又可以精确定量分析而且前处理简单,检测迅速,有着广阔的发展前景。在对ELISA方法的研究中,很多研究人员合成了各种免疫原,免疫后得到抗体,但做这方面的多数为生物方面专家,对各种药物的改造多数都只用简单化学方法连接,做法简单粗糙,后处理只是简单浓缩干燥等,没有合理的合成处理,更没有纯化,及相关表征,往往只是简单的分析是否有间隔臂接上,使其后抗原和抗体效果有好有坏难以稳定。本论文中,我用几种方法对莱克多巴胺,已烯雌酚,甲硝唑几个药物进行了精确全合成,并有效进行了纯化。在连接蛋白的方法上也进行了一定的改进,并对结果进行了相关测定和分析。并用与BSA连接的免疫原免疫新西兰兔得到了莱克多巴胺,已烯雌酚的多克隆抗体。然后用ELISA方法研究抗体与抗原的效价、灵敏度等。本文主要分两个部分:1)莱克多巴胺,已烯雌酚,甲硝唑的半抗原用多种方法进行全合成及抗原制备。本文分别通过琥珀酸酣,戊二酸酣,4-溴丁酸乙酯,碘乙酸与药物进行连接,合成多个半抗原,并对莱克多巴胺进行了多个活性位点反应。2)莱克多巴胺,已烯雌酚,甲硝唑的抗体制备,以及ELISA检测方法的建立。用合成的免疫原制备对应的多克隆抗体,精选其中最好的进行分离纯化后,建立ELISA检测方法,分别对各抗原的不同合成方法,进行对比各种方法合成效果以及不同活性基团的连接效果。
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