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目的:乳腺癌是严重危害女性健康的高发肿瘤。染料木素（genistein,Gen）等植物雌激素可由日常饮食摄入,是否可对乳腺癌细胞产生生长促进作用尚存在争议。睾丸特异性蛋白酶50（testes-specific protease,TSP50）是近年发现的促癌基因,前期发现其与乳腺癌复发密切相关。约70%乳腺癌为雌激素受体（estrogen receptor,ER）阳性型,但TSP50是否受ER所传递信号调节,尚未见报道。本研究的主要目标是观察不同浓度Gen对ER阳性（ER+）和阴性（ER-）乳腺癌的影响,以建立低浓度Gen诱导ER+细胞增殖的模型。在所建立模型中,分析肿瘤细胞内TSP50的表达变化,研究Gen是否通过ER介导的非基因组信号调节TSP50的表达,并初步探讨葡萄原花青素B1（procyanidin B1,PB1）对Gen上调TSP50的拮抗效应。方法:培养ER+型、ER-型乳腺癌细胞和乳腺上皮细胞（MCF-7、MDA-MB-231和MCF-10A）,在不同浓度Gen诱导细胞后用MTT还原法分析细胞增殖的变化。选择Gen对ER+型乳腺癌（MCF-7）的20%生长促进浓度、20%生长抑制浓度和50%生长抑制浓度（5μmol/L、25 μmol/L和100μmol/L）处理细胞,并采用流式细胞术分析细胞周期、细胞凋亡和CD24、CD44和CD326分子的变化,计算其中CD44+CD24-干细胞亚群的百分率。通过免疫印迹技术分析TSP50、MMP-2和ER相关非基因组信号关键分子的变化。在MEK/Erk抑制剂（U0126）或葡萄原花青素B1（procyanidin B1,PB1）与Gen共同处理细胞后,检测细胞内非基因组效应相关信号分子和TSP50表达的变化,并分析CD44+CD24-干细胞亚群的百分率。结果:Gen对不同乳腺癌细胞产生的效应不同,MCF-10A对Gen诱导的细胞凋亡和生长抑制作用最为敏感;而在ER+的MCF-7细胞中,低浓度的Gen（2.5～10μmol/L）表现为生长促进作用;Gen对MCF-10A的抑制也仅表现在高浓度作用下。研究发现,Gen对MCF-7的20%生长促进浓度、20%生长抑制浓度和50%生长抑制浓度分别约为5μmol/L、25μmol/L和100μmol/L。研究中以上述浓度的Gen诱导细胞,分析Gen对细胞周期的影响。对照组、5μmol/L、25μmol/L和100μmol/L的GoG1期细胞百分率的平均值分别为67.60%、64.31%、64.64%和72.76%;S 期细胞百分率为 14.67%、15.64%、15.64%和 11.74%;G2M 期细胞百分率为 14.84%、17.71%、16.21%和 11.57%。结果表明,5μmol/L Gen 导致 MCF-7细胞S期和G2M期细胞增加;25μmol/L Gen导致MCF-7细胞G2M期细胞增加;而100μmol/L Gen处理后,阻滞于G0G1期的细胞增加,而S期和G2M期细胞减少。值得注意的是,5μmol/LGen和25μmol/L Gen处理后,MCF-10A细胞S期和G2M期细胞百分率也略增加。应用流式细胞术对细胞表面分子进行分析,与对照组相比,5μmol/L Gen 和 25μmol/L Gen 处理后,CD24、CD44 和 CD326 表达均增加。CD44+CD24-细胞群体是乳腺癌细胞中的干细胞样亚群,在ER+的MCF-7乳腺癌细胞内,对照组、5μmol/L和25μmol/L Gen组该干细胞亚群的阳性率分别为7.37±0.43%、11.57±1.13%和12.05±0.96%;高浓度的Gen作用后,该亚群百分率下降至6.04±0.22%。采用免疫印迹法分析不同浓度Gen对MCF-7细胞增殖、凋亡相关信号转导分子的影响。结果显示,与对照组相比,5μmol/LGen和25μmol/L Gen处理后,P70S6K1的磷酸化略有增加,同时Erk1的磷酸化显著增加。与对照组相比,MCF-7细胞中MMP-2与TSP50蛋白在5μmol/L浓度下表达增加,在100 μmol/L浓度Gen作用下其表达减少。为研究TSP50表达变化的机制,采用Erk抑制剂U0126与5μmol/L Gen共同处理MCF-7细胞,结果显示,U0126使Erk1磷酸化水平明显降低,且U0126能显著抑制Gen对MMP-2和TSP50蛋白的上调作用,表明MCF-7细胞增殖和TSP50表达可能与MEK/Erk信号通路有关。PB1是葡萄籽富含的一种多酚成分,采用PB1（10μmol/L）与Gen（5μmol/L）共同处理MCF-7细胞,分析相关信号分子和TSP50的变化。结果表明,PB1能使Erk1磷酸化水平显著下降,并抑制Gen导致的Erk1磷酸化、以及对TSP50蛋白上调的作用。通过流式细胞术分析发现PB1可减少CD44+CD24-干细胞亚群的百分率。结论:低浓度的Gen对ER+乳腺癌具有弱的生长刺激作用,并增加CD44+CD24-干细胞亚群的百分率。癌睾丸抗原TSP50可因非基因组效应相关的信号而表达增加;拮抗MEK/Erk或用PB1共同处理细胞,TSP50的表达和干细胞亚群可被有效抑制。