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背景:结肠癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤,对中晚期结肠癌而言,化疗是其主要的治疗手段,虽然近年来结肠癌综合治疗效果有了较大提高,但结肠癌耐药仍是影响化疗疗效和患者预后的重要因素,一些化疗新药(如伊立替康和奥沙利铂)的问世仍无法克服结肠癌耐药所带来的困扰。研究肿瘤耐药机制是克服耐药的基础,而合适的体外耐药模型是研究耐药的前提。既往在肿瘤耐药研究中通常采用细胞单层培养模型,虽取得了一些进展,但针对耐药机制所设计的治疗方法无法在临床上获得成功,其原因在于肿瘤细胞单层培养只注重单个细胞的特性,而无法模拟实体瘤体内生长微环境,减弱了细胞间的相互作用和相互协作。近年发现肿瘤存在多细胞耐药现象,可能是比经典单细胞耐药更为重要的耐药机制。体外采用三维培养模型可较真实地模拟实体瘤生长情况和所处的微环境,在耐药性方面所表现出的特征与体内实体瘤相近。目前对肿瘤多细胞耐药机制的认识尚不完全清楚,细胞粘附可能与肿瘤多细胞耐药有关,当前的研究主要侧重于粘附分子通过对细胞周期的调控而产生耐药。大多数化疗药物可诱导肿瘤细胞凋亡,而肿瘤细胞为了逃避凋亡则产生抑制凋亡的效应,NF-κB是一种重要的凋亡调节因子,在多种刺激剂的作用下被激活,然后抑制细胞凋亡的发生。肿瘤多细胞耐药是否与NF-κB活化有关尚未见报道。目的:1.建立结肠癌体外多细胞耐药模型;2.探讨NF-κB信号转导通路在结肠癌多细胞耐药中的作用及其机制;3.探讨细胞粘附在结肠癌多细胞耐药中的作用及抗粘附处理对耐药的逆转效应;4.通过动物实验初步表明抗粘附治疗对化疗增敏或逆转耐药的作用。方法:1.采用liquid overlay technique对结肠癌细胞株HT-29细胞进行三维培养,单层细胞培养采用常规贴壁法,通过光镜、SEM、TEM等进行形态学观察,radial outgrowth assay和MTT法分别测定三维和单层培养HT-29细胞对5-Fu的敏感性,计算多细胞耐药指数(MCRI),流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率;2.采用免疫组织化学和Western blotting检测粘附分子E-cad和ICAM-1在两种不同培养方式细胞中的表达,采用电泳迁移率改变测定法(EMSA)检测三维或单层培养HT-29细胞NF-κB活性的变化;3.以NF-κB活性抑制剂SN50阻断三维培养HT-29细胞NF-κB活化,EMSA测