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FHL2(four and a half LIM domains protein 2)属于LIM-Only蛋白家族中的一员,可以与不同的蛋白因子互作,作为转录共调节子参与调控基因表达、细胞的增殖分化、细胞迁移和凋亡等诸多生理调节过程。FHL2在卵巢组织中表达,诱导性腺向卵巢分化,并参与调控抑制素基因的表达。但FHL2在小鼠卵巢中的表达定位模式,及对卵泡颗粒细胞的增殖、凋亡及类固醇激素分泌调控作用尚不清楚。为了阐明FHL2在卵巢中的表达定位规律及对卵泡颗粒细胞的调控作用,本研究从基因表达、组织表达、亚细胞定位、功能研究等几方面研究了FHL2对小鼠卵泡颗粒细胞的调控作用。结果如下:1、FHL2在小鼠卵巢中的表达与定位(1)在不同日龄(7d、14d、21d、28d)的小鼠卵巢中,应用RT-PCR的方法证明了FHL2在小鼠卵巢中表达,且在不同日龄小鼠卵巢中表达量没有差异;(2)免疫组化结果表明,FHL2在小鼠卵巢中主要定位于卵泡颗粒细胞和基质细胞中,在各个时期卵泡中表达量差异不大。(3)细胞免疫荧光结果表明,FHL2在小鼠卵泡颗粒细胞亚细胞定位于细胞核。2、FHL2干扰对卵泡颗粒细胞生长和凋亡及分泌功能的影响(1)卵泡颗粒细胞转染干扰质粒72h后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,发现转染组中正常细胞比例显著高于对照组(91.52±0.78 vs 85.78±0.14,P<0.05),细胞晚期凋亡率也显著低于对照组(4.18±0.16 vs 10.18±1.81,P<0.05),凋亡相关蛋白Bcl-2显著上调,Bax和Caspase-3表达水平显著下调,说明干扰后颗粒细胞的存活能力提高。(2)利用流式细胞术分析细胞周期,发现FHL2干扰组处于S期颗粒细胞比例显著多于对照组(36.83±0.40 vs 24.02±0.33,P<0.05),处于G1期的细胞比例显著低于对照组(48.31±1.02 vs 62.96±0.72,P<0.05),周期相关蛋白Cyclin E和Cyclin B表达水平显著提高,P21表达水平显著下调,干扰后影响了颗粒细胞的有丝分裂过程;(3)应用MTT检测转染干扰质粒后的小鼠卵巢颗粒细胞增殖情况,结果表明,相对于对照组,FHL2干扰组细胞活力显著增加(53.60%vs 15.43%,48h,P<0.05;109.86%vs 33.33%,72h,P<0.05),干扰后显著促进了颗粒细胞的增殖;(4)应用ELISA方法检测转染后颗粒细胞类固醇分泌水平,结果表明,相对于对照组,FHL2干扰组雌二醇(8.19±0.19 vs 2.53±0.41,ng/L,P<0.01)和孕酮水平(13.96±1.07 vs 1.64±0.08,ng/m L,P<0.01)显著升高。本课题研究了FHL2在小鼠卵巢组织及卵泡颗粒细胞亚细胞中的表达定位,发现FHL2在不同日龄的小鼠卵巢中表达量没有差异,且主要定位于卵泡颗粒细胞的细胞核中,在不同发育阶段卵泡中表达量差异不大。进一步研究FHL2对颗粒细胞调控作用,结果表明干扰FHL2后能够抑制卵泡颗粒细胞凋亡,促进细胞增殖和分泌类固醇激素,并对细胞的分裂周期有明显的影响。这些结果说明FHL2对小鼠卵泡发育有重要的调控作用,为进一步研究FHL2对卵泡发育调控机制和信号通路研究奠定了基础。