【摘 要】
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目的：构建骨形态发生蛋白-2(BMP-2)真核表达质粒pcDNA3.1-BMP-2,转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)。检测转染后BMP-2基因的表达。方法：(1)利用人外周血中抽提的基因组DNA,通过聚
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目的：构建骨形态发生蛋白-2(BMP-2)真核表达质粒pcDNA3.1-BMP-2,转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)。检测转染后BMP-2基因的表达。方法：(1)利用人外周血中抽提的基因组DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)合成BMP-2基因,将其与pcDNA3.1载体进行基因重组,构建表达质粒pcDNA3.1-BMP-2。再通过PCR及DNA测序的方法检测重组体。(2)利用pcDNA3.1-BMP-2转染兔BMSCs,再通过RT-PCR、免疫组化和蛋白印迹法(Western blot)检测BMP-2基因的表达。结果：(1)经PCR扩增和DNA测序证实,本实验构建的重组质粒目的基因片段为人BMP-2-cDNA。(2)经RT-PCR、免疫组化和Western blot证实,转染pcDNA3.1-BMP-2后的兔BMSCs内有大量BMP-2 mRNA的转录和蛋白的表达,而未转染的兔BMSCs未见阳性表达。结论：(1)本实验成功构建BMP-2真核表达质粒并在兔BMSCs中得到表达。(2)本研究为进一步研究用BMP-2基因转染的方法来加速牵张成骨(Distraction osteogenesis DO)新骨形成的实验奠定了基础。
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