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目的:灵芝(Ganoderma lucidum),也被称为万年茸、木灵芝、灵芝草等,隶属于担子菌纲(Basitdiomycetes)多孔菌科(Polyporaceae)灵芝属(Ganoderma)植物。古代医术记载灵芝具有较高的药食两用的价值,可扶正固本、延年益寿,又因野生灵芝稀少难得,千百年来人们一直视其为珍宝。灵芝孢子粉(Ganoderma lucidum spore)是灵芝生长成熟期由菌盖喷发出的非常微小的生殖细胞,是灵芝遗传活性物质的聚合体,其中三萜类、留醇类、氨基酸类、多糖及生物碱类化合物都是灵芝孢子粉的主要有效成分。众多临床药理研究显示,灵芝孢子粉具有抗肿瘤、免疫调节等药理活性,甚至比灵芝的药效更高。灵芝孢子粉通过二氧化碳超临界流体萃取可得到灵芝孢子油,灵芝孢子油是灵芝孢子中油脂类物质的混合物,有效成分主要包括植物脂肪酸甘油酯类、游离脂肪酸类及少量的灵芝三萜与留醇类。现代研究显示灵芝孢子油的药理活性包括加强化疗药的抑瘤效果,调节机体免疫功能、保肝护肝等,故灵芝孢子油软胶囊已成为广大群众公认的高端保健品。但因植物油外观与灵芝孢子油相近,一些商贩为贪图利益将灵芝孢子油软胶囊中掺加植物油或利用植物油假冒灵芝孢子油,影响病人的疾病医治,而国内外对灵芝孢子油软胶囊质量控制的研究报道并不多,市场上也无统一的监督管理机制,造成灵芝孢子油软胶囊产品品质良莠不齐,伪品无从辨别。因此有必要对市场上流通的灵芝孢子油软胶囊进行全面的质量研究,规范灵芝孢子油软胶囊的质量,为生产企业、监督管理部门提供简便有效的灵芝孢子油软胶囊的质控方法。本课题组在前期对灵芝孢子油原料的化学成分及质量标准进行了深入研究的基础之上,提出对灵芝孢子油软胶囊进行全面的质量研究及与植物油进行比较研究。方法:1.灵芝孢子油软胶囊与植物油的薄层色谱研究建立灵芝孢子油软胶囊与植物油所含植物脂肪酸甘油酯的薄层定性鉴别研究方法,对硝酸银薄层板的制备方法(硝酸银溶液的浓度、硝酸银薄层板的活化时间)、展开溶剂等薄层色谱条件进行优化,观察不同因素(温度及湿度)下对展开效果的影响。2.灵芝孢子油软胶囊与植物油的含量测定研究建立HPLC-ELSD法(高效液相色谱-蒸发光散射检测法)对灵芝孢子油软胶囊中代表性成分1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯的含量测定研究,并测定植物油中该成分含量,优化HPLC的色谱条件,进行试验方法学考察。3.灵芝孢子油软胶囊与植物油的指纹图谱研究建立14批灵芝孢子油软胶囊中植物脂肪酸甘油三酯类成分的HPLC-ELSD指纹图谱,采用指纹图谱参数、相似度评价软件对14批样品指纹图谱进行分析,应用SPSS软件对各特征指纹色谱峰进行主成分分析与系统聚类分析;并与植物油的HPLC色谱图相比,结合灵芝孢子油软胶囊、植物油HPLC谱图的整体特征面貌指认两者图谱中共有指纹峰和特征色谱峰,从而定性鉴别灵芝孢子油软胶囊与伪品。结果:本实验运用定性鉴别和定量测定相结合的方式对市场上的灵芝孢子油软胶囊进行了全面的质量研究,并与伪品植物油进行了比较分析,为更好地控制灵芝孢子油软胶囊的质量提供有效的实验参数。(1)灵芝孢子油软胶囊与植物油的薄层色谱定性鉴别研究结果,薄层板为10%硝酸银溶液浸泡活化而成,石油醚:乙酸乙酯(5:1)作为展开溶剂系统,展开后薄层斑点分布清晰,各斑点间分离良好,灵芝孢子油软胶囊的薄层斑点与植物油相比有明显差异。(2)含量测定研究中以色谱柱:DiamonsilC18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-异丙醇(体积比51:49)为流动相,流速:1.0 mL·min-1,柱温:室温,检测器:蒸发光散射检测器(ELSD),ELSD漂移管温度:47℃,载气流速:3.2L·minL-1,进样量:20μL,分析时间为60min,作为色谱条件。结果显示14批灵芝孢子油软胶囊中含量最大的代表性成分平均含量为26%,各植物油(橄榄油除外)中该成分的含量在4%～12%之间,相差较大,橄榄油中该成分的含量与灵芝孢子油软胶囊相差无几。(3)建立了灵芝孢子油软胶囊中植物脂肪酸甘油酯的HPLC-ELSD指纹图谱,标定了 10个共有色谱峰,采用对照品指认了其中4个峰。相似度评价结果显示,14批灵芝孢子油软胶囊谱图的相似度在0.703～0.998之间。灵芝孢子油软胶囊HPLC-ELSD指纹图谱与植物油的HPLC谱图存在显著的差异。结论:本研究建立了灵芝孢子油软胶囊的质量研究方法,及与伪品植物油的比较分析,该方法简便、特异、重现性好,可为灵芝孢子油软胶囊的质量控制提供参考。