头颈部肿瘤是全球第五类最常见恶性肿瘤，其发病率占全身恶性肿瘤的5％左右。在头颈部肿瘤中，喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC）约占25％，居第二位。根据国内外报道，其发病率每年以25％的速度逐年上升，常好发于中老年男性，我国东北地区是喉癌的高发地区。喉癌对放化疗不敏感，手术是其治疗的主要手段。因此，寻找喉癌发生发展分子标志物将为喉癌早期诊断和治疗提供新的线索。尽管目前的研究已经发现若干用于评价喉癌进展的可能生物学标志物，但是它们尚未在临床工作中得到实际应用。因此对喉癌进行早期诊断，并在基因水平寻求新的诊治分子标志物仍是当前亟需解决的问题。　　 人类染色质域解旋酶DNA结合蛋白5(chromodomain helicase DNA-bindingprotein5，CHD5)基因定位于1p36，含42个外显子，编码的蛋白质分子量约为223KD，属于CHD蛋白质家族的第5个成员。CHD家族是染色质重塑酶SNF2蛋白超家族的成员。这类蛋白质通过改变核小体DNA的亲和性而影响染色质的结构，即屏蔽某个DNA区域的同时暴露其他部位，从而参与细胞的调节。　　 我们前期研究结果提示CHD5基因启动子区高甲基化致该基因在喉癌中表达下调，从而参与喉癌的发生与进展。作为染色质域解旋酶DNA结合蛋白，我们推测CHD5在肿瘤细胞核型转归和细胞周期进展亦发挥作用。因此，本研究中我们拟应用相关分子生物学技术检测转染CHD5基因后喉癌细胞核型和细胞周期的变化及其相互作用蛋白质，以探讨其对喉癌细胞核型和细胞周期的影响，并为深入研究该基因在喉癌细胞核型和细胞周期中作用的分子机制提供线索。　　 材料与方法:　　 以喉癌Hep-2细胞系为实验材料，应用免疫荧光、RT-PCR和Western Blot检测喉癌细胞系中CHD5基因的定位及表达情况以评价转染效率。在Hep-2细胞同步化基础上，将CHD5基因转染Hep-2细胞，应用G显带技术检测喉癌Hep-2细胞核型，应用流式细胞术检测Hep-2细胞周期的变化，统计分析CHD5基因表达水平和Hep-2染色体核型、细胞周期变化之间关系，探讨CHD5对喉癌细胞核型和细胞周期的影响。同时，应用免疫沉淀和质谱技术筛查和鉴定与CHD5相互作用的蛋白质。　　 实验结果:　　 1、免疫荧光结果显示:转染pcDNA3.1-CHD5后，在Hep-2细胞系细胞质和细胞核中均检出绿色荧光，提示CHD5蛋白定位于Hep-2细胞的细胞质和细胞核且证实基因转染成功;　　 2、RT-PCR和Western Blot结果显示:转染pcDNA3.1-CHD5后，Hep-2细胞的CHD5 mRNA和蛋白表达水平较对照组显著升高(P＜0.05)，进一步提示转染成功;　　 3、流式细胞术检测结果显示:Hep-2细胞经TDR同步化处理后，将所占比例最高(76.99％)的G1期细胞的时间定为同步化后0小时。因此，6.5小时S期细胞所占比例最高，为94.56％，7小时G2期细胞所占比例最高，为38.46％;　　 4、流式细胞术检测结果表明:与未转染组相比，转染CHD5组Hep-2细胞在同步化处理后6小时CHD5已显著推迟Hep-2细胞由G1期进入S期;同步化后8小时转染组G2和S期细胞所占比例分别显著高于和低于同步化后7小时未转染组，提示CHD5抑制了细胞周期的进展且作用于G1/S期检控点;　　 5、流式细胞术检测结果表明:未转染和转染CHD5组超二倍体细胞数目在同步化后0、18和36小时分别为0.03和0.01、1.93和2.67、2.83和5.94，各时间点两组超二倍体细胞数目均具有显著差异(P＜0.01），提示CHD5具有维持Hep-2细胞基因组稳定性作用。　　 6、细胞核型分析结果表明:未转染组细胞染色体数目平均为71条，转染CHD5组细胞染色体数目平均为62条，差异具有显著性(P＜0.05），提示CHD5具有维持Hep-2细胞基因组稳定性的作用，但核型呈不规则变化，提示这种作用不具有染色体特异性;　　 7、免疫沉淀和质谱鉴定结果发现7个与CHD5相互作用的蛋白质，分别为ADT2、ACTB2、ACTC1、GFAP、CCDC157、CNGB1和ZEP2。　　 结论:　　 1、在Hep-2细胞中，CHD5蛋白定位于细胞质及细胞核中;　　 2、CHD5使喉癌Hep-2细胞由G1进入S期时间显著延长，提示该基因具有抑制细胞周期进程的作用且作用于G1/S期检控点;同时，CHD5使Hep-2细胞染色体数和超二倍体细胞数显著减少，提示CHD5具有维持Hep-2细胞基因组稳定性作用;　　 3、CHD5使染色体核型发生不规则变化，提示该基因对喉癌细胞核型的影响不具有染色体特异性;　　 4、CHD5相互作用蛋白质的发现为深入研究CHD5在调节Hep-2细胞周期和基因组稳定性的作用机制奠定了理论基础。